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β2-肾上腺受体激动剂类药物多被用于动物饲料等以提高动物生长和肉品瘦肉率。孔雀石绿常作为水产养殖的添加剂以防治鱼类疾病。这些药物在动物食品中的残留会导致急性中毒,对人类的健康有着潜在的危害。目前检测β2-肾上腺受体激动剂类药物和孔雀石绿残留的化学方法有气相色谱-质谱法(GC-MS)和高效液相色谱法(HPLC)等,这些化学方法虽然非常敏感、准确,但检测时间长、费力、复杂、耗资大,不适合大量样品的筛选测定。基于抗原-抗体特异反应的免疫检测方法因其快速准确的特点而适用于大样本的筛查。
小分子半抗原不能诱导机体的免疫反应,因此需要与载体蛋白分子偶联后才具有免疫原性,但是许多小分子的化学结构并不满足与载体蛋白直接偶联的条件;另外,为了保证偶联后的小分子抗原具有强免疫原性和有正确的特异反应位点,这就需要通过化学手段对小分子进行修饰、改造甚至合成。
以上述问题为出发本文以牛血清蛋白(BSA)为载体分别运用了混合酸酐法、EDC法、EDC-NHS联用法、重氮化法和化学合成法分别制备了RAC抗原、CL抗原、MG抗原。对合成方法进行了对比评价、利用薄层层析法对莱克多巴胺丁二酸酰化物(RAC-HS)和羧基化孔雀石绿(CMG)进行了鉴定;利用紫外扫描对RAC抗原和MG抗原进行了鉴定;利用胶体金法对RAC抗原和CL抗原进行了鉴定。并且测定了RAC抗原的偶联比:混合酸酐法为1:20;EDC法为1:16;EDC-NHS法为1:24;CL抗原的偶联比为1:32;利用制备得到的CL抗原免疫的Bal/c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/0融合,得到能稳定分泌抗CL-BSA抗体的杂交瘤细胞株35株。
本文对RAC抗原、CL抗原和MG抗原的制备研究为开发ELISA检测试剂盒奠定了坚实基础。