论文部分内容阅读
生物活性成分的分离分析及其抗氧化性筛选是药物研究中的重要内容，也是分析工作者关注的重点。本文采用毛细管电泳技术建立了两个分离分析不同生物活性成分的新方法，同时以Fenton反应产生的羟自由基(·OH)为对象，以乙基罗丹明B为捕获剂，分别采用毛细管电泳法、荧光光谱法和分光光度法建立了三个测定·OH的新方法，并用这些方法研究了一些有机酸和食品的抗氧化性。
一、本论文从毛细管电泳的分离模式与原理及其在生物活性成分的分离分析中的应用两方面对天然活性成分的毛细管电泳分离分析研究进行了概述。此外，论文还就自由基的分类与产生、自由基与疾病以及自由基的检测方法三方面对自由基的研究进行了回顾与总结。
二、采用高效毛细管电泳方法，建立了一个同时分离测定血竭中龙血素A和龙血素B的新方法，以及一个同时分离测定果汁中部分有机酸的新方法。
1、在详细优化了分离测定条件后，选择了20mmol/L的硼砂-9.0％乙腈(v/v)-1.0％正丁醇(v/v)-5.0％乙二醇(v/v)的缓冲溶液(pH9.78)为运行电解质溶液，在22kV的分离电压和25℃的柱温下，用57cmx75gm(i.d，有效长度50cm)的毛细管建立了一个同时测定龙血素A和龙血素B的新方法。该方法可以在15min内实现血竭样品中龙血素A和龙血素B以及它们与共存组分之间的有效分离，具有较高的灵敏度、较宽的线性范围和很好的重现性，用于不同来源的血竭样品中龙血素A和龙血素B定量测定的相对标准偏差均在5％以内，加标回收率位于90％～110％之间。
2、采用毛细管区带电泳(CZE)模式，建立了一个同时分离测定维生素c、绿原酸、没食子酸、苯甲酸、水杨酸和山梨酸的CZE新方法。方法采用的电泳条件为：以20mmol/L KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液(pH 5.74)为电泳介质，以石英毛细管(57cm×75μm(i.d)，有效长度50cm)为分离通道，分离电压25Kv，柱温25℃。在此条件下，所研究的6个有机酸可以在12min得到有效分离。用此方法对苹果汁、橙汁、葡萄汁、酸角汁和胡萝卜汁中这六种有机酸的含量进行了同时分离测定，得到了满意的结果。
三、以乙基罗丹明B对 Fenton反应产生的羟自由基(·OH)的捕捉为反应基础，分别采用毛细管电泳法、荧光光谱法和分光光度法建立了三个测定·OH的新方法，并对方法的应用性进行了研究。
1、以高效毛细管电泳为理论依据，采用Fenton反应产生羟自由基(·OH)，并用乙基罗丹明B作为·OH捕获剂，在对电泳分离的缓冲溶液浓度、pH值、仪器条件及Fenton反应条件主要是Fenton试剂用量优化后，以乙基罗丹明B浓度为定量指标，建立一个分离测定·OH的高效毛细管电泳法，并用该方法对绿原酸、没食子酸、抗坏血酸、山梨酸、苯甲酸和水杨酸的抗氧化性以及苹果汁、橙汁、葡萄汁、酸角汁和胡萝卜汁的抗氧化性进行了研究。此方法未见文献报道，具有高效、快速、准确和灵敏的特点，有一定的应用价值。
2、基于Fenton反应产生的·OH可以氧化乙基罗丹明B并使其在最大激发和发射波长(λex/λem=473nm/594nm)处的荧光强度下降的现象，以乙基罗丹明B在氧化前后荧光强度的变化值为参数，在详细优化了反应与测定条件后，建立了一个测定·OH的荧光光谱法。用该方法测得的硫脲的抗羟自由基氧化能力明显大于甘露醇，这与已有报道相符，证明了方法的研究结果具有可靠性。在此基础上，用该方法测定了一系列有机酸和茶叶提取溶液的抗氧化性，证明普洱茶提取溶液的抗氧化性小于其它茶叶。
3、乙基罗丹明B可以被Fenton反应产生的·OH氧化退色，基于此，本文选定乙基罗丹明B的最大吸收波长554nm为测定波长，pH5.06的KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液为反应介质，建立了一个测定·OH的光度分析方法。方法具有简单、快速的特点，用于研究硫脲和甘露醇的抗羟自由基氧化能力，所得结果与已有报道相符，同时，用该方法研究一系列有机酸和茶叶提取溶液的抗氧化性，得到的结果与荧光光谱法基本一致，证明本文建立的方法是可靠的。