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高血压是一种慢性的心脑血管疾病,是冠心病、脑卒中等心脑血管疾病的主要危险因素。据统计,全世界每年因高血压引起的心脑血管疾病的死亡人数超过260万,高血压病已成为全球性的重大的公共卫生问题。
降血压肽是一种具有生物活性的肽,它通过抑制血管紧张素转换酶(ACE)活性而达到降血压的作用。可广泛地应用于现代食品、保健品、医药等各领域。食物蛋白来源的降血压肽无毒、无副作用,采用酶解方法水解过程易于控制,价廉易于推广。本文通过筛选出蛋黄蛋白质制备降血压肽的蛋白酶,系统地研究了酶反应条件对降血压肽制备的影响,并给出了各自适宜的反应条件。
产物体外活性检测方法采用高效液相色谱分析,检测条件为:柱HypersilC184.0*250nm,5μm;检测波长228nm;柱温30℃;流动相MeOH∶H2O=15∶85(含0.1%THF);流速1.0mL/min,体系中马尿酸与其它物质能够进行很好地分离。
采用酶法制备降血压肽,以不同种类蛋白酶对用不同方法处理的原料蛋白质进行酶解,结果均显示碱性蛋白酶的水解产物对ACE的抑制活性最高。超临界萃取蛋白质酶解产物抑制率高达72.81%,且蛋白质回收率为78%,选择具有对ACE体外抑制活性最高的碱性蛋白酶作为制备蛋黄降血压肽的最佳用酶。
实验中考察了水解时间、温度、pH值、底物浓度及加酶量变化时水解度随时间的变化情况,得到蛋黄蛋白质酶解作用的最适水解时间为300min、温度为45℃、pH为9.5、底物浓度为6.3%、加酶量为7%。在此条件下,蛋黄蛋白质水解物对血管紧张素转换酶(ACE)的半抑制浓度IC50为1.22mg/mL。
用活性炭对蛋黄蛋白质水解液进行脱色处理,方法简单可行,以酶解液脱色率和蛋白质损失率作为考察指标,得出活性炭对蛋黄蛋白酶解液脱色的适宜条件为:活性炭用量2%、酶解液pH为3.5、脱色温度40℃、吸附时间30min,此时蛋黄降压肽酶解液脱色率为87%,蛋白质损失率为15%。