【摘 要】
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疫苗接种是预防传染性疾病的最有效的手段,但目前无有效的疫苗经皮递送剂型,其重要组分免疫佐剂也常引发毒、副作用。研究表明,霍乱毒素(CT)的B亚基与细胞膜上的GM1神经节苷
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疫苗接种是预防传染性疾病的最有效的手段,但目前无有效的疫苗经皮递送剂型,其重要组分免疫佐剂也常引发毒、副作用。研究表明,霍乱毒素(CT)的B亚基与细胞膜上的GM1神经节苷脂受体结合,是CT发挥经皮免疫原性和免疫佐剂功能的必要条件。而可以帮助药物透膜的细胞穿膜肽在药物递送系统中的应用也越来越广泛。因此,我们假设GM1受体结合多肽(GM1-bps)能够作为抗原和药物的载体,提高抗原提呈和药物穿膜的效率,并进行了相关研究。本实验先从能够与GM1结合的多肽库中,结合细胞穿膜肽的特性,选取两种多肽DP和VP。首先通过体外的细胞摄取实验,证明无论在37℃还是4℃情况下,OVA-DP组的巨噬细胞摄取率均高于OVA、OVA-VP、OVA +DP和OVA +VP组。再通过体内的疫苗接种实验证明OVA与多肽DP共价偶联组血清中特异性抗体IgG含量明显高于OVA组。说明多肽DP以共价连接的方式通过帮助模式抗原OVA透过细胞膜,提高抗原提呈率,从而有效增强机体免疫反应,是一种有效、低毒的免疫佐剂。为了获得更优良的免疫佐剂,接着将多肽DP与免疫佐剂PEI联用。通过体外的转染实验和细胞毒性实验,证明多肽DP和PEI简单混合后作为转染试剂,虽未降低细胞毒性,但是转染效率明显得到提高。同时体内的动物实验结果也表明,多肽DP和PEI简单混合组的血清中特异性抗体IgG含量明显高于OVA组,且高于OVA和PEI联用组。其佐剂效果与正控弗氏不完全佐剂组齐平。说明GM1结合多肽DP与PEI简单混合之后,可以提高物质进入细胞的机率,从而有效提高PEI的免疫佐剂效果,增强了机体的免疫反应。综上所述,本文首次证明两种GM1结合肽中,多肽DP和抗原共价偶联后可以增加抗原透过细胞膜的量、提高免疫提呈效率、增强抗原的免疫效果,DP和PEI联合使用还可以增强后者的佐剂效果。
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