基于Aux/IAA家族转基因水稻维管束鞘细胞淀粉积累株系的筛选与鉴定

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水稻作为典型C3作物,其光合作用效率及产量比玉米等C4植物低。利用基因工程技术将C4型光合作用导入水稻,将为提高水稻的实际产量和生产潜力提供可能性。植物转录因子(TFs)作为基因表达的关键调节因子,对于调控基因表达至关重要。本研究采用农杆菌介导的遗传转化法将玉米中26个Aux/IAA家族转录因子基因转化到“日本晴”水稻,对转基因植株进行维管束鞘细胞淀粉累积株系的筛选与鉴定,为其水稻光合作用及其产物运输机制的研究,提供材料和技术支撑。主要研究结果如下:
  1.利用Gateway克隆技术构建了26个玉米Aux/IAA基因家族转录因子基因的过表达载体。
  2.通过农杆菌介导的水稻转化试验将表达载体上的目的基因导入―日本晴‖水稻,愈伤诱导率约为94.66%,分化率约为84.56%;对T0代株系进行目的基因检测,阳性率为100%。
  3.所得转基因苗取分蘖期叶片切片后,经碘-碘化钾(I2-KI)染色,获得维管束鞘细胞淀粉积累的株系共计2个,分别为aux3、aux8。
  4.农艺性状调查结果表明,与野生型相比,aux3株系株高、千粒重、结实率均显著降低;aux8株系农艺性状数据与野生型无显著差异。
  5.光合测定结果表明,与野生型相比,aux3株系净光合速率显著降低,aux8株系蒸腾速率和气孔导度显著升高。
  6.淀粉含量分析表明,分蘖期转基因株系叶片中淀粉含量均显著高于野生型。7.转基因株系淀粉代谢相关基因较野生型呈现出差异性表达。两个转基因株系中淀粉合成的关键限速酶基因AGPL1均表现高表达,这有利于叶片内ADP-葡萄糖的合成;在aux3株系中,蔗糖转运蛋白(SUTs)关键基因SUT4表达显著降低,推测可能蔗糖运输受阻。在aux8株系中,淀粉合成酶(SS)关键基因GBSSⅡ表达量增高,推测可能淀粉合成增多,分解和运输不及时,造成淀粉积累。
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