【摘 要】
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目的:探讨心肌特异性钠通道SCN5a(Nav1.5)在心肌缺血再灌注过程中的变化和变化机制。
方法:1.建立大鼠心肌缺血再灌注模型及乳鼠心肌细胞氧化应激模型,western blot技术
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目的:探讨心肌特异性钠通道SCN5a(Nav1.5)在心肌缺血再灌注过程中的变化和变化机制。
方法:1.建立大鼠心肌缺血再灌注模型及乳鼠心肌细胞氧化应激模型,western blot技术及免疫组织化学技术检测大鼠心室肌组织及不同浓度H2O2(0μM,50μM,200μM)处理下的乳鼠心室肌细胞中SCN5a蛋白的表达;2.用Real Time RT-PCR检测不同浓度H2O2作用下乳鼠心肌细胞中SCN5AmRNA的表达量;3.取大鼠心室肌组织及急性分离大鼠心室肌细胞,免疫共定位技术验证CAV3蛋白与SCN5a的功能共定位关系;4.构建含有SCN5a mRNA3UTR的报告基因重组体,与miR-328共转染至HEK293细胞,利用Luciferase技术检测荧光活性。
结果:1.缺血大鼠心室肌及经H2O2处理的心肌细胞与正常组相比SCN5a蛋白表达量降低(P＜0.05);2.经H2O2处理的乳鼠心室肌细胞与正常组相比SCN5A mRNA表达量无明显差异;3.CAV3蛋白与SCN5a通道蛋白在心室肌细胞膜上存在表达上的共定位关系;4.Luciferase结果显示miR-328降低SCN5A连接的报告基因的荧光活性(n=6,P＜0.05)
结论:miR-328通过直接与SCN5A3-UTR结合及间接通过caveolin-3实现其对靶基因蛋白表达的抑制作用,最终引起心肌缺血再灌性心律失常。
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