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人重组粒细胞集落刺激因子(rhG—CSF)能够促进造血干细胞向中性粒细胞增殖、分化。还可动员成熟中性粒细胞从骨髓进入外周。rhG—CSF已经成为现今抗肿瘤化疗，放疗以及骨髓移植手术后最重要的辅助药物之一。但是rhG—CSF的临床应用存在体内半衰期短，易被酶水解和肾脏清除，需要多次注射的问题，这不仅给患者带来了很大的不便，而且重复注射也会引起一些不良反应。聚乙二醇(PEG)具有良好的生物相容性、无毒性和无抗原性等优点，修饰后的蛋白和多肽类药物的药代动力学和药效学性质能够得到改善。本论文对rhG—CSF的未成键17位半胱氨酸(Cys17)进行了定点PEG化修饰，并对其体外、体内稳定性和生物活性作了初步的研究。
使用马来酰单甲氧PEG(mPEG—Mal)对rhG—CSF的未成键Cys17进行了定点PEG化修饰，经SDS—PAGE电泳测定PEG—G—CSF的修饰度在mPEG—Mal与rhG—CSF摩尔比为20：1时为46.4％。其表观分子量为在34到36kDa之间，是一分子PEG(5kDa)和rhG—CSF(19.6kDa)之和24.6kDa的1.14到1.22倍。使用FPLC分离纯化得到单PEG化rhG—CSF(monoPEG—G—CSF)。然后用MTT细胞增值法测定monoPEG—G—CSF对NFS—60细胞的增殖作用，并测定monoPEG—G—CSF对pH酸碱性、温度、胰蛋白酶、人血清和小鼠肝匀浆的稳定性，用白细胞增殖计数法测定其体内活性。实验结果显示，虽然Cys17定点修饰monoPEG—G—CSF的体外活性有所下降，为未修饰rhG—CSF活性的62.73％，但其体外稳定性较未修饰rhG—CSF有不同程度的提高，同时其体内促血细胞增值作用为未修饰rhG—CSF的2.82倍，PEG—G—CSF组的白细胞数量的增加值在i．v．72小时后仅比G—CSF组的最大值时的增加值少5.29％。通过以上结果显示，monoPEG—G—CSF可以有效的增长rhG—CSF体内半衰期，并具有很好的临床应用前景。