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目的:
探索长期给予大剂量吴茱萸水煎液肝毒性的作用特点、毒性机制和肝损伤血清酶学生物标志物，为临床安全用药提供实验依据。
方法:
(1)吴茱萸水煎液致动物亚急性实验:KM小鼠随机分为吴茱萸高剂量组(56g生药·kg-1·d-1)、低剂量组（28g生药·kg-1·d-1）和正常组，连续灌胃给药或蒸馏水28d。分别于给药后1d、7d、14d、21d、28d时间点处理，检测血清ALT、AST、TB水平，取肝，计算肝脏指数和进行肝组织病理学检查。另取Wistar大鼠灌胃给予40g生药/kg·d或20g生药/kg·d吴茱萸水煎液28d，正常组组灌胃给予等容积的蒸馏水20ml/kg。于给药后1d、7d、14d、21d、28d取血，检测血清ALT、AST、TB水平，于28d取肝，计算肝脏指数和进行肝组织病理学检查。
(2)吴茱萸水煎液致动物肝损伤血清酶学生物标志物的研究: KM小鼠随机分为吴茱萸组（30g生药·kg-1·d-1）和正常组，连续灌胃给药或蒸馏水35d。分别于给药后3d、7d、14d、21d、28d、35d和恢复期(7d)进行处理，检测血清ALT、AST、TB、TBA、ALP水平，ELISA方法检测血清GLDH、α-GST、PNP、Arg-1水平。取肝，计算肝脏指数和进行肝组织病理学检查。取亚急性实验中低剂量组大鼠血清，ELISA方法检测1d、7d、14d、21d、28d的GLDH、α-GST、PNP、Arg-1水平。
(3)吴茱萸致小鼠肝脏毒性机制研究:KM小鼠随机分为吴茱萸高剂量组(30g生药·kg-1·d-1)、中剂量组（20g生药·kg-1·d-1）、低剂量组（10g生药·kg-1·d-1）和正常组，连续灌胃给药或蒸馏水21d。于给药21d后测定肝组织中SOD活性、MDA含量、GSH含量、GSH-px活性、NOS活性，计算SOD/MDA比值;采用ELISA法测定肝组织中炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-6水平。
(4)吴茱萸碱和吴茱萸次碱对小鼠及人原代肝细胞的毒性研究:选用小鼠或人原代肝细胞悬浮液(1x105/ml)，分别加入20、10、5、2.5、1.25、0.5、0.2 ug/mL吴茱萸碱或吴茱萸次碱。采用MTT法检测细胞活力。
结果:
(1)吴茱萸水煎液致动物亚急性实验:小鼠实验结果显示，与正常组比较，在给药7天后，吴茱萸高剂量组ALT明显升高(p＜0.05)，低剂量组ALT在21d有明显升高(p＜0.05)，持续至28天。高剂量组AST于28d明显升高(p＜0.05)，有一定的时-量-效关系。高、低剂量组脏器指数均于给药1d即明显升高(p＜0.05或0.01），持续至28天。给药28天后，少数动物出现多发肝细胞灶性坏死和炎症细胞浸润。
大鼠实验结果显示，与正常组比较，吴茱萸高、低剂量组ALT、AST、TP均无明显变化，高、低剂量组脏器指数在给药28天后均可见明显升高(p＜0.05)。肝组织无明显病变，高剂量组极个别动物可见炎症细胞的浸润。
(2)吴茱萸水煎液致动物肝损伤血清酶学生物标志物的研究:小鼠给药后，与正常组比较，药物组的α-GST、PNP和Arg-1均于7d明显升高（p＜0.05或0.01），GLDH于14d明显升高(p＜0.01)，上述指标升高均持续至42天;且有一定的时-效关系。
大鼠给药后，与正常组比较，药物组GLDH、Arg-1和PNP均于7d明显升高（p＜0.05或0.01），α-GST于14d明显升高(p＜0.05)，上述指标升高均持续至28天，且有一定的时-效关系。
(3)吴茱萸致小鼠肝毒性机制研究:与正常组比较，吴茱萸高剂量组小鼠肝组织SOD/MDA比值、GSH-PX和NOS活性明显下降(P＜0.05)，GSH含量显著升高(P＜0.05);炎症介质TNF-α，IL-1β、IL-6含量显著升高(P＜0.01)。
(4)吴茱萸碱和吴茱萸次碱对小鼠及人原代肝细胞的毒性研究:MTT法结果显示，吴茱萸碱和吴茱萸次碱对小鼠及人原代肝细胞活性均无明显影响。
结论:长期灌胃给予大剂量吴茱萸水煎液，可致小鼠或大鼠轻度肝损伤。氧化应激、炎症反应可能是吴茱萸致肝损伤机制之一。此外，血清中α-GST、Arg-1、GLDH和PNP可以作为检测吴茱萸肝损伤血清酶学的生物标志物。