氧化葡糖杆菌ddsA基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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该课题系“构建生产辅酶Q<,10>大肠杆菌基因工程菌”项目的一部分.聚十异戊烯焦磷酸合成酶催化异戊烯二磷酸与丙烯基二磷酸发生连续的缩合反应生成聚十异戊烯焦磷酸,构成辅酶Q<,10>的侧链,这是微生物合成辅酶Q<,10>的关键步骤之一.以氧化葡糖杆菌(Gluconobacter oxydans)的染色体DNA为模板,通过PCR扩增得到了聚十异戊烯焦磷酸合成酶基因(ddsA).测序分析表明该基因有一个948bp的ORF,编码一条大约34.8kDa的多肽链,氨基酸序列与其他聚戊烯焦磷酸合成酶具有高度同源性(30~50﹪).将ddsA基因分别克隆到lac、trc和T7启动子下游,构建了不同的表达质粒,在大肠杆菌中获得一定的表达.同时对表达产物的活性进行了初步的研究和分析.
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