论文部分内容阅读
根据基因生理生化功能、猪肥度形状和耳状QTL定位结果,选取GDF11基因和BMP5基因作为影响猪肥度性状的候选基因。应用比较基因组学和生物信息学等方法进行候选基因的分离鉴定;采用RT-PCR进行部分基因的组织表达研究;利用PCR-RFLP方法检测两个候选基因共7个单核苷酸多态性;以大梅F2资源家系（322头）为试验材料,进行基因多态性与猪肥度性状关联分析。主要研究结果如下:1.GDF11基因:（1）获得猪GDF11基因2562bp的cDNA序列,其中包括1209bp的编码区序列,286bp的5’UTR序列和1065bp的3’UTR序列。（2）利用罗斯林研究所Prof.Archibald提供的SNP信息,建立了第1内含子的PCR-HhaⅠ-RFLP分型技术。（3）遗传标记与肥度性状的关联分析结果表明:HhaⅠ多态位点与大梅F2资源家系猪的体长显著相关（P＜0.05）,基因加性效应显著（P＜0.05）;与肋骨数显著相关（P＜0.05）,基因加性效应显著（P＜0.05）;与臀部背膘厚显著相关（P＜0.05）,基因加性效应显著（P＜0.05）;与瘦肉率极显著相关（P＜0.01）,基因加性效应极显著（P＜0.01）。（4）组织表达谱分析表明,GDF11在11个组织中都有表达,其中在肌肉和脂肪组织中高表达,心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中中量表达,在肺、子宫、卵巢、胃和小肠中微量表达。2.BMP5基因:（1）获得猪BMP5基因2633bp的cDNA序列,其中包括1456bp的编码区序列,658bp的5’UTR序列和519bp的3’UTR序列。（2）利用罗斯林研究所Prof.Archibald提供和自己获得的SNP信息,建立了BMP5基因第1外显子的PCR-SacⅠ-RFLP分型技术、第1内含子的PCR-HpaⅡ-RFLP分型技术、第3内含子的PCR-RsaⅠ-RFLP分型技术、第5内含子的PCR-PstⅠ-RFLP分型技术、第5内含子的PCR-EcoRⅠ-RFLP分型技术和3’UTR的PCR-RsaⅠ-RFLP分型技术。（3）遗传标记与肥度性状的关联分析结果表明:第3内含子RsaⅠ多态位点与背膘厚显著相关（P＜0.05）;与内脂和内脂率显著相关（P＜0.05）;与肥肉率极显著相关（P＜0.01）;与体长显著相关（P＜0.05）。（4）组织表达谱分析表明BMP5在肌肉组织中中量表达,在心脏、肺和肾脏中微量表达,其他组织中不表达。（5）构建了2个miRNA重组载体plet-7c和pmir-184,并在成纤维细胞中进行了超表达,实时定量RT-PCR结果显示miRNA在细胞中高表达,半定量RT-PCR结果显示BMP5 mRNA表达减弱,说明let7c和mir-184可能参与了BMP5的表达调控。上述研究结果显示:GDF11基因第1内含子的HhaⅠ位点和BMP5基因第3内含子的RsaⅠ多态位点可作为猪肥度性状分子遗传标记。对上述基因的分离、鉴定、多态性及表达调控研究有助于我们更深地了解基因的生物学功能,为揭示猪肥度性状分子机理和标记辅助选择的实施提供理论依据。