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本论文内容包括三部分:
第一部分对武汉市经屠宰所获卵巢的质量进行了调查研究。主要收集了卵巢形态特征,黄体形态特征,不同大小卵泡数量三个方面的数据,并对数据间的关系进行了分析,旨在摸清武汉当地经屠宰所获得的卵巢质量的情况,提高卵母细胞收集效率,为卵母细胞的体外培养方案的制定提供参考。
第二部分为体外受精体系的优化试验。旨在通过研究种公牛、胚胎培养密度、颗粒细胞共培养三个方面对体外受精效率的影响,进一步优化本实验室早前建立的牛体外受精体系。
第三部分为培养液对牛体外受精胚胎发育的影响研究。着重研究了三种牛体外胚胎培养常用培养液(KSOM,CR1,SOF)对胚胎发育的影响。通过对胚胎囊胚率,细胞总数及抗冻性进行比较,以获得最适合牛体外受精胚胎体外培养的培养液。
1、第一部分结果
1.1、本次调查分别在5月份,9月份,12月份收集到了95对(190枚)卵巢。以文献报道作为参考,从卵巢形态学上进行评定,在所收集的卵巢中,质量一般的卵巢(NO-NO,CL+DF-NO)占到了总数的46.31％,质量好的卵巢(CL-NO)只占总数的32.63％,质量较差的卵巢(DF-NO)占到了5.26％,此外还含有10.53％的因出现囊肿而不能利用的卵巢;从卵巢形态学上进行评定,在所收集的卵巢中,50％以上的卵巢不含黄体;从卵泡直径大小对所收集的卵巢的质量进行评定的话,绝大部分卵泡为2-4mm,占到总卵泡的85％,而6-8mm的卵泡所占比例却不到6％。
1.2、重量为5-10g组的卵巢,所含有的小卵泡的数量极显著地高于重量小于5g组的卵巢(P<0.01),也显著地高于重量大于10g组的卵巢(P<0.05)。在中卵泡数量上,5-10g组显著地高于大于10g组(P<0.05)。在大卵泡数量上,三个组之间差异均不显著(P>0.05)。三组不同的卵巢重量与小卵泡数量之间均存在正相关,而当卵巢重量超过10g后,卵巢重量与大卵泡数量之间不存在相关性。
1.3、卵巢形态对不同大小的卵泡数量存在影响。在小卵泡数和总卵泡数上,CL-NO组和NO-NO组要显著地高于DF-NO组和CY-NO组(P<0.05);在中卵泡的数量上,各组差异均不显著(P>0.05);在大卵泡的数量上,CY-NO组显著地低于其他五组,差异显著(P<0.05)。
2、第二部分结果
2.1、选取了四头西门塔尔公牛的冻精进行实验,编号分别为6303,6305,6306,6307,研究种公牛冻精对牛体外受精胚胎发育的影响。结果发现,在卵裂率上编号为6303的公牛显著高于其他三头公牛(P<0.05)。而在囊胚率上,编号为6303的公牛与编号为6305的公牛差异不显著(P>0.05),但都显著高于其他两头公牛(P<0.05)。说明公牛因素对体外受精效率存在非常大的影响,6303号公牛效果最好。
2.2、将假定受精卵随机按25μL/个、5μL/个、1μL/个三种培养密度进行培养,每个微滴中放入20~25个假定受精卵,研究培养密度对牛体外受精胚胎发育的影响。结果表明:三个处理间无论是在卵裂率、囊胚率,还是在孵化囊胚率上均不存在差异(P>0.05)。说明三种培养密度均能用于牛体外受精胚胎的体外培养。
2.3、将假定受精卵随机放入含有GCM和不含GCM的微滴中进行培养,研究颗粒细胞共培养对牛体外受精胚胎发育的影响。结果发现,对比于非共培养组(对照组),共培养组在卵裂率,囊胚率和孵化率上差异均不显著(P>0.05)。在本实验中,说明使用颗粒细胞共培养有利于胚胎发育的效应并不明显。
3、第三部分结果
体外受精后,将假定受精卵随机放入三种培养液中,研究培养液对牛体外受精胚胎发育的影响。受精当天记为0 d,受精后第6~8 d统计囊胚率。将获得的囊胚一部分用Hoechst33342进行染色,统计其细胞总数。余下的采用OPS法进行冷冻,解冻。解冻后分别在12 h,24 h,36 h观察胚胎复活情况。结果发现,在卵裂率和总囊胚率上,KSOM组显著高于CR1组(P<0.05)。在第7 d的囊胚形成率上,KSOM组显著高于其他两组(P<0.05);在细胞总数方面,KSOM组细胞数最多,显著高于其他两组(P<0.05);在胚胎抗冻性上,各处理间差异不显著(P>0.05)。说明KSOM更加适合牛体外受精胚胎的发育,能获得质量更好的胚胎。
第一部分对武汉市经屠宰所获卵巢的质量进行了调查研究。主要收集了卵巢形态特征,黄体形态特征,不同大小卵泡数量三个方面的数据,并对数据间的关系进行了分析,旨在摸清武汉当地经屠宰所获得的卵巢质量的情况,提高卵母细胞收集效率,为卵母细胞的体外培养方案的制定提供参考。
第二部分为体外受精体系的优化试验。旨在通过研究种公牛、胚胎培养密度、颗粒细胞共培养三个方面对体外受精效率的影响,进一步优化本实验室早前建立的牛体外受精体系。
第三部分为培养液对牛体外受精胚胎发育的影响研究。着重研究了三种牛体外胚胎培养常用培养液(KSOM,CR1,SOF)对胚胎发育的影响。通过对胚胎囊胚率,细胞总数及抗冻性进行比较,以获得最适合牛体外受精胚胎体外培养的培养液。
1、第一部分结果
1.1、本次调查分别在5月份,9月份,12月份收集到了95对(190枚)卵巢。以文献报道作为参考,从卵巢形态学上进行评定,在所收集的卵巢中,质量一般的卵巢(NO-NO,CL+DF-NO)占到了总数的46.31％,质量好的卵巢(CL-NO)只占总数的32.63％,质量较差的卵巢(DF-NO)占到了5.26％,此外还含有10.53％的因出现囊肿而不能利用的卵巢;从卵巢形态学上进行评定,在所收集的卵巢中,50％以上的卵巢不含黄体;从卵泡直径大小对所收集的卵巢的质量进行评定的话,绝大部分卵泡为2-4mm,占到总卵泡的85％,而6-8mm的卵泡所占比例却不到6％。
1.2、重量为5-10g组的卵巢,所含有的小卵泡的数量极显著地高于重量小于5g组的卵巢(P<0.01),也显著地高于重量大于10g组的卵巢(P<0.05)。在中卵泡数量上,5-10g组显著地高于大于10g组(P<0.05)。在大卵泡数量上,三个组之间差异均不显著(P>0.05)。三组不同的卵巢重量与小卵泡数量之间均存在正相关,而当卵巢重量超过10g后,卵巢重量与大卵泡数量之间不存在相关性。
1.3、卵巢形态对不同大小的卵泡数量存在影响。在小卵泡数和总卵泡数上,CL-NO组和NO-NO组要显著地高于DF-NO组和CY-NO组(P<0.05);在中卵泡的数量上,各组差异均不显著(P>0.05);在大卵泡的数量上,CY-NO组显著地低于其他五组,差异显著(P<0.05)。
2、第二部分结果
2.1、选取了四头西门塔尔公牛的冻精进行实验,编号分别为6303,6305,6306,6307,研究种公牛冻精对牛体外受精胚胎发育的影响。结果发现,在卵裂率上编号为6303的公牛显著高于其他三头公牛(P<0.05)。而在囊胚率上,编号为6303的公牛与编号为6305的公牛差异不显著(P>0.05),但都显著高于其他两头公牛(P<0.05)。说明公牛因素对体外受精效率存在非常大的影响,6303号公牛效果最好。
2.2、将假定受精卵随机按25μL/个、5μL/个、1μL/个三种培养密度进行培养,每个微滴中放入20~25个假定受精卵,研究培养密度对牛体外受精胚胎发育的影响。结果表明:三个处理间无论是在卵裂率、囊胚率,还是在孵化囊胚率上均不存在差异(P>0.05)。说明三种培养密度均能用于牛体外受精胚胎的体外培养。
2.3、将假定受精卵随机放入含有GCM和不含GCM的微滴中进行培养,研究颗粒细胞共培养对牛体外受精胚胎发育的影响。结果发现,对比于非共培养组(对照组),共培养组在卵裂率,囊胚率和孵化率上差异均不显著(P>0.05)。在本实验中,说明使用颗粒细胞共培养有利于胚胎发育的效应并不明显。
3、第三部分结果
体外受精后,将假定受精卵随机放入三种培养液中,研究培养液对牛体外受精胚胎发育的影响。受精当天记为0 d,受精后第6~8 d统计囊胚率。将获得的囊胚一部分用Hoechst33342进行染色,统计其细胞总数。余下的采用OPS法进行冷冻,解冻。解冻后分别在12 h,24 h,36 h观察胚胎复活情况。结果发现,在卵裂率和总囊胚率上,KSOM组显著高于CR1组(P<0.05)。在第7 d的囊胚形成率上,KSOM组显著高于其他两组(P<0.05);在细胞总数方面,KSOM组细胞数最多,显著高于其他两组(P<0.05);在胚胎抗冻性上,各处理间差异不显著(P>0.05)。说明KSOM更加适合牛体外受精胚胎的发育,能获得质量更好的胚胎。