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奶牛属于经济型动物,在获取样品过程中,为了避免诸如抓捕、捆绑和静脉穿刺等应激和伤害,我们提出采用牛奶中的体细胞作为获取DNA的来源,提取的DNA作为PCR扩增的模板。产奶性状是由多基因控制的数量性状,乳分泌过程中脂肪球的分泌,主要是在形成带有一组膜蛋白的适当形状乳脂滴的基础之上而形成的,而且嗜乳脂蛋白在乳分泌过程中起着关键的作用。嗜乳脂蛋白基因具有控制脂肪球大小的功能,对脂肪球膜而言具有重要贡献,该基因产物可能作为决定乳脂产量高低的重要因子。在本研究中,陈述了嗜乳脂蛋白基因exon1和exon3 SNP和产奶性状之间的关系(305天产奶量,乳脂率、乳蛋白率、体细胞评分和成年当量)。热应激对奶牛生产是害的,并且影响着奶牛的采食量和产奶性能。热应激蛋白(heat shock proteins,HSPs)是机体在应激条件下所产生的一组特异性蛋白质,能使机体迅速适应环境变化,而且作为重要的分子伴侣参与动物的热应激反应。在本研究中,陈述了热应激蛋白基因SNP和产奶性状之间的关系(305天产奶量,乳脂率、乳蛋白率、体细胞评分和成年当量)。研究结果如下:
1.建立从牛奶中提取基因组DNA的方法。并已申请专利,申请号为200810115822.9。
2.建DNA含量与体细胞数之间的线性回归方程:Y=4.54X-1.44,相关系数r=0.98。成功提取1μgDNA至少需要1.7×10~7个体细胞。
3.502头中国荷斯坦奶牛BBTN1A1基因exon1多态性研究。以奶中提取的DNA作为PCR的模板,使用PCR-RFLP分子标记方法进行多态性研究,扩增片段为578bp,经TaqⅠ酶切后,使用2％的琼脂糖凝胶电泳检测,发现A和B等位基因,等位基因频率分别为0.7131和0.2869,检测到AA型、AB型和BB型三种基因型,其频率分别为0.4502,0.5259和0.0239。测序结果显示,在334bp处的碱基T和336bp处的碱基T分别突变为c和A。经χ~2适合性检验结果表明该位点在群体中处于哈迪温伯格平衡状态,关联分析后发现,305天产奶量方面AA基因型和AB基因型间差异显著(P<0.05),乳脂率、乳蛋白率、体细胞评分、成年当量在AA基因型和AB基因型间差异显著(P<0.01)。
4.287头中国荷斯坦奶牛BBTN1A1基因exon3多态性研究。使用PCR-RFLP分子标记方法进行多态性研究,扩增片段为578bp,经MboI酶切后,使用2％的琼脂糖凝胶电泳检测,发现A和B等位基因,等位基因频率分别为0.1132和0.8868,检测到AA型、AB型和BB型三种基因型,其频率分别为0.0105,0.2055和0.7840。测序结果显示,在381bp处的碱基G突变为A。经χ~2适合性检验结果表明该位点在群体中处于哈迪温伯格不平衡状态,关联分析后发现,305天产奶量方面AB基因型和BB基因型间差异显著(P<0.05),成年当量在AB基因型和BB基因型间差异显著(P<0.01)。
5.185头中国荷斯坦奶牛HSPA1B基因多态性研究。使用PCR-RFLP分子标记方法进行多态性研究,扩增片段为995bp,经SpⅡ酶切后,使用2％的琼脂糖凝胶电泳检测,发现A和B等位基因,等位基因频率分别为0.3946和0.6504,检测到AA型、AB型和BB型三种基因型,其频率分别为0.0865,0.6162和0.2973。测序结果显示,在881bp处的碱基C突变为T。经χ~2适合性检验结果表明该位点在群体中处于哈迪温伯格不平衡状态,关联分析后发现,在乳脂率方面AB基因型和BB基因型间差异显著(P<0.05)。
1.建立从牛奶中提取基因组DNA的方法。并已申请专利,申请号为200810115822.9。
2.建DNA含量与体细胞数之间的线性回归方程:Y=4.54X-1.44,相关系数r=0.98。成功提取1μgDNA至少需要1.7×10~7个体细胞。
3.502头中国荷斯坦奶牛BBTN1A1基因exon1多态性研究。以奶中提取的DNA作为PCR的模板,使用PCR-RFLP分子标记方法进行多态性研究,扩增片段为578bp,经TaqⅠ酶切后,使用2％的琼脂糖凝胶电泳检测,发现A和B等位基因,等位基因频率分别为0.7131和0.2869,检测到AA型、AB型和BB型三种基因型,其频率分别为0.4502,0.5259和0.0239。测序结果显示,在334bp处的碱基T和336bp处的碱基T分别突变为c和A。经χ~2适合性检验结果表明该位点在群体中处于哈迪温伯格平衡状态,关联分析后发现,305天产奶量方面AA基因型和AB基因型间差异显著(P<0.05),乳脂率、乳蛋白率、体细胞评分、成年当量在AA基因型和AB基因型间差异显著(P<0.01)。
4.287头中国荷斯坦奶牛BBTN1A1基因exon3多态性研究。使用PCR-RFLP分子标记方法进行多态性研究,扩增片段为578bp,经MboI酶切后,使用2％的琼脂糖凝胶电泳检测,发现A和B等位基因,等位基因频率分别为0.1132和0.8868,检测到AA型、AB型和BB型三种基因型,其频率分别为0.0105,0.2055和0.7840。测序结果显示,在381bp处的碱基G突变为A。经χ~2适合性检验结果表明该位点在群体中处于哈迪温伯格不平衡状态,关联分析后发现,305天产奶量方面AB基因型和BB基因型间差异显著(P<0.05),成年当量在AB基因型和BB基因型间差异显著(P<0.01)。
5.185头中国荷斯坦奶牛HSPA1B基因多态性研究。使用PCR-RFLP分子标记方法进行多态性研究,扩增片段为995bp,经SpⅡ酶切后,使用2％的琼脂糖凝胶电泳检测,发现A和B等位基因,等位基因频率分别为0.3946和0.6504,检测到AA型、AB型和BB型三种基因型,其频率分别为0.0865,0.6162和0.2973。测序结果显示,在881bp处的碱基C突变为T。经χ~2适合性检验结果表明该位点在群体中处于哈迪温伯格不平衡状态,关联分析后发现,在乳脂率方面AB基因型和BB基因型间差异显著(P<0.05)。