论文部分内容阅读
随着养殖业的发展,畜禽粪便污染现象越来越严重。但是传统的畜禽粪污处理方法投资大、运行成本高、人力、物力耗费较大,因此我们迫切的需要寻找一种新型的、投入少、收益多的养殖模式。近几年兴起的发酵床养殖模式是一种零排放、零污染、能源消耗较少的养殖模式,它以其节能、提高猪肉品质、增加经济效益等优点倍受养殖户和专家们的青睐。究其本质,是微生物对畜禽粪污的一个降解过程,因此对发酵床中的微生物进行研究,可以帮助我们了解粪污处理的本质。与此同时,还有助于我们利用这些微生物来研制新的高效的生物菌剂。本试验采用传统分离培养与现代分子生物学技术PCR-DGGE相结合的方法,对发酵床中的优势放线菌进行了分离、鉴定,得到如下结论:
(1)通过DNA提取、PCR-DGGE、回收、克隆、测序,共得到放线菌条带11条,其中优势条带2条,次优势条带3条。并将得到的九个测序结果提交到NCBI比对,得到了9株菌种,其中已知菌种4种,分别为:诡诈分支杆菌(AF480600)、干燥棒状杆菌(AM233487)、Actinocorallia aurantiaca(AJ293701)、Janibacter sp.DE08(DQ227675);4株未培养的菌种;1株微球菌属(AB247644)的菌种。
(2)本研究对放线菌分离培养时的杂菌抑制进行了研究。研究结果表明:采用样品120℃湿灭1h,同时在高氏培养基中加入100mg/L K2Cr2O7的方法可以有效的抑制放线菌分离培养时细菌和真菌的污染问题。
(3)得到了中温放线菌72株。并对筛选出的20株典型的菌株进行了菌落特征观察、形态学鉴定、生理生化鉴定。
(4)得到了4株产蛋白酶的菌株,其中1株的产蛋白酶能力较强;1株产酪氨酸的菌株;4株分解纤维素的菌株。
(5)在对中温放线菌进行生理生化鉴定时得到一株产蛋白酶效果较好的菌株8F3,因此本试验对8F3产蛋白酶条件进行了优化。试验结果表明:在盛有40ml pH为7的液体高氏培养基的250mL的三角瓶中,接种3％的种子培养液,37℃发酵72h得到的蛋白酶的活性最大。
(1)通过DNA提取、PCR-DGGE、回收、克隆、测序,共得到放线菌条带11条,其中优势条带2条,次优势条带3条。并将得到的九个测序结果提交到NCBI比对,得到了9株菌种,其中已知菌种4种,分别为:诡诈分支杆菌(AF480600)、干燥棒状杆菌(AM233487)、Actinocorallia aurantiaca(AJ293701)、Janibacter sp.DE08(DQ227675);4株未培养的菌种;1株微球菌属(AB247644)的菌种。
(2)本研究对放线菌分离培养时的杂菌抑制进行了研究。研究结果表明:采用样品120℃湿灭1h,同时在高氏培养基中加入100mg/L K2Cr2O7的方法可以有效的抑制放线菌分离培养时细菌和真菌的污染问题。
(3)得到了中温放线菌72株。并对筛选出的20株典型的菌株进行了菌落特征观察、形态学鉴定、生理生化鉴定。
(4)得到了4株产蛋白酶的菌株,其中1株的产蛋白酶能力较强;1株产酪氨酸的菌株;4株分解纤维素的菌株。
(5)在对中温放线菌进行生理生化鉴定时得到一株产蛋白酶效果较好的菌株8F3,因此本试验对8F3产蛋白酶条件进行了优化。试验结果表明:在盛有40ml pH为7的液体高氏培养基的250mL的三角瓶中,接种3％的种子培养液,37℃发酵72h得到的蛋白酶的活性最大。