【摘 要】
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R基因中最大的类型为NBS-LRR，根据NBS-LRR基因保守区域设计引物，从多种植物中克隆到许多结构上与抗病基因类似的序列(RGAs)。稻瘟病是水稻的重要病害，已从水稻中克隆并验证了3个抗稻瘟病基因的功能，它们都属于NBS-LRR类抗病基因。本文用简并引物从广东普通野生稻中克隆出多条RGA并测定其序列，并对序列进行了分析。用RT-PCR从培矮64中扩增出抗稻瘟病基因Pi-k全长cDNA。1．根据
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R基因中最大的类型为NBS-LRR，根据NBS-LRR基因保守区域设计引物，从多种植物中克隆到许多结构上与抗病基因类似的序列(RGAs)。稻瘟病是水稻的重要病害，已从水稻中克隆并验证了3个抗稻瘟病基因的功能，它们都属于NBS-LRR类抗病基因。
本文用简并引物从广东普通野生稻中克隆出多条RGA并测定其序列，并对序列进行了分析。用RT-PCR从培矮64中扩增出抗稻瘟病基因Pi-k全长cDNA。
1．根据己克隆的NBS-LRR类抗病基因保守序列设计简并引物，用PCR的方法从普通野生水稻材料中扩增出抗病基因类似物(RGA)并测序。从广东普通野生稻HLW028中扩增出1条500bp的片段，克隆到T载体后，随机挑取5个克隆测序，结果测出了3个序列，经同源性分析均为NBS-LRR。提交到NCBI数据库中，接受号DQ272573～DQ272575。从广东普通野生稻GZW035中测出1条序列，与水稻中的NBS-LRR基因具有同源性，但只有短的读码框架。从NCBI中下载普通野生水稻和功能已知的水稻NBS-LRR类基因，与本试验所提交的NBS-LRR进行聚类分析，这些NBS-LRR可分为5大类，其中DQ272574是一个新的NBS-LRR基因类型。从野生水稻中克隆NBS-LRR基因存在P-loop、RNBS-A、kin-2、RNBS-B、RNBS-C和PLAL的基序。Southern杂交结果表明，野生水稻HLW028和GZW035中具有与DQ272574同源的3个拷贝。
2．提取野生水稻HLW028、GZW035及栽培稻培矮64的总RNA，利用RT-PCR法从3种总RNA中扩增Pi-k的cDNA。从培矮64中扩增出1个约990bp的片段，克隆测序后，发现它具有1个完整的读码框架。提交NCBI，接受号为EF532592。从NCBI下载日本晴和tetep的Pi-k基因序列，聚类分析结果表明籼稻型不育系培矮64中Pi-k基因的序列与粳稻型日本晴具有更大的一致性，达99％。而与籼稻型tetep的Pi-k基因的一致性较小，只有95％。多序比较的结果表明，培矮64中Pi-k基因的结构与日本晴相似。与tetep相比，培矮64和日本晴Pi-k基因中都有1个38bp的插入序列(In/Del)。在培矮64与日本晴Pi-k基因中发现了5个单核苷酸多态性(SNP)，平均190bp出现1个SNP；而培矮64与tetep的SNP达40个，平均为24bp就出现1个SNP。
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