猪肌肉组织EST的基因克隆与表达分析

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该研究从猪背最长肌EST入手,运用现有的生物信息资源,克隆猪新基因;并运用RT-PCR-DHPLC基因表达半定量技术分析新基因在不同组织和不同品种间的差异表达,以期发现与猪重要经济性状(生长、胴体和肉质)相关的候选基因,为研究猪功能基因组提供重要帮助.该研究所获得的主要结果如下:1 通过对影响实验条件的优化,在该实验室建立一套切实可行的网上进行电子克隆新基因和基因表达RT-PCR-DHPLC半定量技术.2 首次报道了猪的7个基因cDNA序列(包括编码区).3 应用RT-PCR-DHPLC半定量技术,研究部分基因在杜洛克猪、大白猪和蓝塘猪背最长肌表达.结果发现:S23和β-actin基因mRNA在杜洛克和蓝塘猪背最长肌中表达量之比均为1.5;说明S23基因mRNA在杜洛克和蓝塘猪背最长肌中表达量没有差异.TNNC2和β-actin基因mRNA在杜洛克背最长肌中表达量之比为1.0,而蓝塘猪背最长肌中表达量之比为0.87;表明TNNC2基因mRNA在杜洛克背最长肌中表达高.TMP3基因和β-actin基因mRNA在杜洛克背最长肌中表达量之比为1.0,在蓝塘猪背最长肌中表达量之比为7.2;说明TMP3 mRNA在蓝塘猪猪背最长肌中表达高.CAV-1和β-actin基因mRNA在大白猪背最长肌中表达量之比为1.33,在蓝塘猪背最长肌中表达量之比为2.24;说明CAV-1基因mRNA在蓝塘猪猪背最长肌中表达高,为研究猪生长、胴体和肉质性状分子基础提供依据.4利用Unigene数据库分析7个基因的电子表达图谱,并验证部分基因在心、肝、脾、肺、肾、胃、肱二头肌、股四头肌、脂肪、背最长肌十个组织中表达.结果表明:CAV-1基因mRNA在大白、蓝塘猪各组织和长白猪除肺之外的九个组织中都有表达.TMP3基因在长白猪肝脏、肱二头肌、股四头肌、背最长肌和大白猪心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏以及蓝塘猪十个组织均有表达.TNNC2基因在长白和蓝塘猪肱二头肌、股四头肌、背最长肌以及大白猪心脏、肝脏、肱二头肌、股四头肌、背最长肌组织均有表达,从而进一步充实基因电子表达谱.
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