【摘 要】
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目的：本实验建立原代培养的大鼠脑微血管内皮细胞（Rat brain microvascular endothelial cells，rBMECs）模型为体外BBB模型，考察离体情况下T-80-NT-NP在血脑屏障上的转运特性极其转
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目的：本实验建立原代培养的大鼠脑微血管内皮细胞（Rat brain microvascular endothelial cells，rBMECs）模型为体外BBB模型，考察离体情况下T-80-NT-NP在血脑屏障上的转运特性极其转运机制。 方法：以PBCA为载体材料，采用乳化聚合法制备NT-NP，经T-80修饰，制得T-80-NT-NP。原代培养大鼠脑微血管内皮细胞（rBMECs），大脑组织碎片经150μm，75μm滤网过滤后，Ⅱ胶酶消化分离得到rBMECs，建立体外BBB细胞模型。MTT法考察T-80和T-80-NT-NP对rBMECs的细胞毒性作用。以体外BBB的rBMECs为细胞模型，考察时间、温度、浓度对T-80-NT-NP摄取、外排的影响。采用Millicell insert结合培养rBMECs，建立跨 BBB转运的体外细胞转运模型，考察T-80-NT-NP在 BBB上的转运特性。 结果：NT-NP外观呈圆形或类圆形，平均粒径78.3 nm，分散均匀，包封率和载药量分别为80.25％和0.124%，Zeta电位为-15.37 mV；rBMECs培养约5-6天后，生长成致密单层细胞，具有生长接触抑制现象，但未见重叠生长。MTT法，T-80溶液浓度在﹥400 ng·mL-1时，对rBMECs无显著毒性；含原药NT浓度100~400 ng·mL-1范围之间，原药NT和NP毒性都有浓度依赖性；浓度≥200 ng·mL-1的NP对rBMECs毒性显著增加；NP毒性比原药NT有显著增大，有显著性差异（p<0.01）；T-80包裹NP比未包裹毒性大，但未见显著差异（p>0.05）。NT-NP和T-80-NT-NP在rBMECs上摄取、外排都具有时间、温度、浓度依赖性：无论在37℃和4℃、不同浓度和不同孵育时间条件下，rBMECs对T-80-NT-NP的摄取量和外排时细胞内滞留药物量均显著高于未T-80修饰NT-NP。Millicell insert结合培养rBMECs的跨BBB细胞模型的TEER值为（146.5±1.43Ω·cm2）；NP比原药NT，转运量有极其显著增加（p<0.01）；且T-80-NT-NP比NT-NP，转运量有显著增加（p<0.05）。 结论：揭示rBMECs对T-80-NT-NP摄取可能是主动内吞过程；P-gp外排系统亦参与了此转运；T-80-NT-NP对rBMECs的细胞毒性可能是透BBB机制之一。本实验方法的建立亦为T-80-NT-NP在rBMECs其他转运机制研究奠定基础。
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