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目的:观察粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)表达质粒体内转染及黄芪多糖(astragalus polySgCCharide,APS)腹腔注射对小鼠髓源性树突状细胞(DC)前体的诱导作用,为探索乙肝新的免疫治疗提供研究基础。
方法:(1)30只BALB/c小鼠随机分为对照组,100μg剂量组和200μg剂量组。注射1周,分离骨骼肌,抽提RNA,利用RT-PCR观察反转录水平;分离小鼠骨髓细胞,并以重组小鼠粒/巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)诱导培养DC,倒置显微镜下观察其形态,并做扫描电镜检测。ELISA 法检测小鼠血清中的GM-CSF表达量,流式细胞仪检测其表面分子CD80,CD86,CD11c,MHC-Ⅱ类分子表达情况。(2)30只BALB/c小鼠随机分为生理盐水组、APS 100 mg/kg、APS 200 mg/kg三个剂量组腹腔注射,体内诱寻小鼠髓源性DC前体和未成熟DC。1周后称量脾重,ELISA检测血清中GM-CSF表达量,分离小鼠骨髓单个核细胞,体外诱导小鼠髓源性DC前体,倒置显微镜观察细胞生长状态,电镜检测细胞形态,流式细胞仪检测CD11c、MHC-Ⅱ类分子及协同刺激分子CD80、CD86表达情况。
结果:(1)GM-CSF质粒体内转染后,ELISA检测血清中GM-CSF表达量,与对照组比较,100μg组和200μg组表达量均有明显升高(P<0.01);流式细胞仪检测显示100μg组和200μg组CD11c表达较对照组明显升高(P<0.01), MHC-Ⅱ类分子表达也有明显升高(P<0.05),CD80和CD86较对照组无明显升高(P>0.05)。(2)APS腹腔注射7天后,APS 100 mg/kg和200 mg/kg组小鼠脾脏重量均较对照组有明显增加(P<0.01);流式细胞仪检测结果显示:APS100mg/kg和200mg/kg组CD11c表达明显高于对照组(P<0.01),MHC-Ⅱ类分子表达水平高于空白对照组(P<0.05),但CD80,CD86表达量较空白对照组无明显差异;ELISA 检测血清中GM-CSF表达量,结果与对照组无明显统计学差异(P>0.05)。
结论:(1)实验显示GM-CSF的体内转染可以促进髓源性DC前体数量的增加或增强DC前体向成熟DC转化的能力,对探索治疗慢性乙肝的有效措施具有一定价值。(2)实验结果显示APS可以诱导小鼠髓源性DC前体增殖,并以DC2为主,进而说明APS腹腔注射可能诱导免疫耐受。但APS促进DC前体增殖的机制尚需进一步研究,此外DC表面是否表达APS的特异受体,APS是否可以做为DC疫苗的免疫佐剂以及在体内对DC的影响等也值得深入研究。