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目的:阐明Notch1靶基因Hes1在调节HSC活化过程中的作用,并进一步弄清在HSC中是否存在Notch1与TGF/BMP共同调节Hes1的表达。 方法:(1)培养原代肝星状细胞(HSCs)不同天数(1、3、7、10天)后,通过免疫荧光技术(immunofluorescence)检测HSCs标记分子Desmin、GFAP和活化标记分子α-SMA的表达情况;(2)通过RT-PCR检测α-SMA、collagen1α2、Notch受体(Notch1-4)及 Notch靶基因 Hes1、Hey1的表达;(3)在HSC-T6细胞中分别高表达pcDNA-NICD1、pcDNA-Hes1、ALK3、ALK5及空载质粒后,通过Western blotting及荧光素酶报告基因技术检测α-SMA、collagen1α1、collagen1α2及Hes1的表达;(4)运用有效Hes1-decoy封闭转录因子Hes1在HSC-T6的作用后,通过荧光素酶报告基因技术检测α-SMA、collagen1α2启动子的活性。 结果:(1)培养原代肝星状细胞(HSCs)不同天数后,Notch1与Hes1的表达降低;(2)在HSC-T6中高表达pcDNA-NICD1与pcDNA-Hes1后,结果显示Notch1受体能降低α-SMA、collagen1α1、collagen1α2的表达;而Notch1的靶基因Hes1却有增强α-SMA、collagen1α2表达的作用;(3)在HSC-T6中高表达ALK3(BMP信号激活型受体样激酶3)能进一步增强Notch1激活Hes1表达的效应;(4)在HSC-T6中高表达ALK5(TGF-β信号激活型受体样激酶5)能抑制Notch1激活Hes1表达的效应。 结论:Hes1能促进HSC的活化并能被Notch1与TGF/BMP信号协同调节,选择性阻断Hes1表达有可能阻断肝纤维化发生。