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背景三氧化二砷(Arsenic Trioxide, ATO, AS2O3)是人类最早用于治疗肿瘤的中药,具有多种药理作用。近年来对三氧化二砷抗肿瘤作用的研究成为热点,但其对中枢神经系统肿瘤作用的研究还较少,所以本实验选用大鼠胶质瘤细胞C6来研究三氧化二砷的抗肿瘤作用,并研究其联合顺铂(Cisplatin, DDP)的抗胶质瘤作用。本文分两部分阐述：第一部分阐述三氧化二砷联合顺铂对体外大鼠胶质瘤细胞C6的抑制作用；第二部分探讨三氧化二砷联合顺铂对体内大鼠胶质瘤细胞C6的抑制作用。第一部分三氧化二砷联合顺铂对体外大鼠胶质瘤细胞C6的抑制作用的研究目的探讨三氧化二砷联合顺铂对体外胶质瘤细胞C6的增殖、凋亡及周期的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色试验法(MTT法)检测不同浓度的As2O3、CDDP及As203联合CDDP对C6细胞抑制率；根据MTT检测结果设空白对照组、As203组、CDDP组和As203联合CDDP组,在倒置显微镜下观察各组细胞生长状态,用流式细胞仪检测C6细胞的细胞周期分布及总凋亡率。Western blot去检测C6细胞内相关蛋白的表达。结果MTT法实验结果显示：不同浓度(3.125、6.25、12.5μmol/L)的As203对C6细胞作用24h后的增殖抑制率分别为2.28±0.16%、15.32±0.53%、34.42±0.48%；不同浓度(2.5、5、10μmol/L)的CDDP对C6细胞作用24h后的增殖抑制率分别为8.63±0.22%、21.32±0.51%、31.59±0.79%；不同浓度(3.125+2.5、6.25+5、12.5+10μmol/L)的AS2O3+CDDP对C6细胞作用24h后的增殖抑制率分别为20.28±0.51%、55.43±0.73%、76.33±0.38%；与空白对照孔抑制率相比差异性有统计学意义(P<0.05)。倒置显微镜下可见：CDDP组和As203联合CDDP组C6胶质瘤细胞脱落死亡明显,尤以联合组更明显,比空白对照组及As203组细胞生长缓慢,且数量稀少；As203组与空白对照组无明显差别。流式细胞仪检测结果显示：不同药物(空白、As2O3、CDDP和As203联合CDDP)对C6细胞作用24h后,G2期的细胞比例分别为3.01±0.32%、9.93±0.41%、40.18±0.73%和60.18±±0.56%,联合组、CDDP组、As203组与空白对照组(3.01±±0.32%)相比差异性有统计学意义(P<0.05)；流式细胞仪检测细胞总凋亡率结果显示：不同药物(空白、As2O3、CDDP和As203联合CDDP)对C6细胞作用24h后,其细胞总凋亡率分别为2.39±0.03%、4.61±0.02%、14.59±0.12%和36.144±0.39%,联合组、CDDP组与空白对照组(2.39±0.03%)相比差异性有统计学意义(P<0.05), As2O3组与空白对照组(2.39±0.03%)相比差异性没有统计学意义(P>0.05)。Western blot实验结果显示：不同药物(空白(As2O3、CDDP和As203联合CDDP)对体外C6胶质瘤细胞作用24小时后其细胞内Caspase-3的蛋白表达率分别为10.15±3.17%、15.38±2.56%、30.69±2.42%、41.56±1.43%,As203组与空白对照组Caspase-3的蛋白表达水平相比差异性没有统计学意义(P>0.05),CDDP组及联合组与空白对照组Caspase-3的蛋白表达水平相比差异性有统计学意义(P<0.05)；PTEN蛋白的表达率分别为10.19±3.16%、13.38±2.56%、25.69±2.41%、35.56±1.44%,As203组与空白对照组PTEN蛋白的表达水平相比差异性没有统计学意义(P>0.05),CDDP组及联合组与空白对照组PTEN蛋白的表达水平相比差异性有统计学意义(P<0.05)；P13K蛋白的表达率分别为55.19±3.27%、43.38±2.58%、15.69±2.41%、10.56±1.44%,As203组与空白对照组P13K蛋白的表达水平相比差异性没有统计学意义(P>0.05),CDDP组及联合组与空白对照组P13K蛋白的表达水平相比差异性有统计学意义(P<0.05); Akt蛋白的表达率分别为65.19±±3.27%、53.38±±2.58%、25.69±±2.41%、15.56±±1.44%,As203组与空白对照组Akt蛋白的表达水平相比差异性没有统计学意义(P>0.05),CDDP组及联合组与空白对照组Akt蛋白的表达水平相比差异性有统计学意义(P<0.05)。结论三氧化二砷联合顺铂对C6胶质瘤细胞具有增殖抑制作用,其机制可能是通过G2期阻滞,上调Caspase-3. PTEN及下调PI3K、Akt,从而诱导C6细胞凋亡。第二部分三氧化二砷联合顺铂对体内大鼠胶质瘤细胞C6抑制作用的研究目的探讨三氧化二砷联合顺铂对体内C6胶质瘤细胞的增殖和凋亡影响的机制。方法HE染色法检测不同药物(As2O3、CDDP和As2O3联合CDDP)对体内C6细胞增殖及凋亡的影响；免疫组化检测不同药物(As2O3、CDDP和As2O3联合CDDP)对体内C6胶质瘤细胞内Caspase-3和IκB-α的影响；并观察大鼠的生存情况。结果HE染色结果显示：不同药物(空白、As2O3、CDDP和As2O3联合CDDP)对体内C6胶质瘤细胞作用7d后增殖抑制作用；空白对照组显示：大量的肿瘤细胞聚集,细胞核大,深染；细胞胞浆少,染成红色；未见明显的胶质瘤细胞凋亡及坏死。As2O3组、CDDP组及联合用药组可见部分胶质瘤细胞的细胞核浓缩或裂解,胞浆增多,红染,胞体明显缩小；尤以联合组明显,还可见肿瘤组织内液化坏死红染组织。免疫组化结果显示：不同药物(空白、As2O3n CDDP和As2O3联合CDDP)对体内C6细胞作用7d后其细胞因子Caspase-3的阳性表达率分别为0.52±0.08%、1.15±0.09%、2.54±0.14%、5.61±0.22%；As2O3组与空白对照组Caspase-3的阳性表达水平相比差异性有统计学意义(P<0.05),CDDP组及联合组与空白对照组Caspase-3的阳性表达水平相比差异显著有统计学意义(P<0.001)。不同药物(空白、As2O3、CDDP和As2O3联合CDDP)对体内C6细胞作用7d后其IκB-α的阳性表达率分别为3.47±0.19%、2.29±0.12%、1.04±0.11%、0.48±0.12%；As2O3组与空白对照组IκB-α的阳性表达水平相比差异性没有统计学意义(P>0.05),CDDP组及联合组与空白对照组IκB-α的阳性表达水平相比差异性有统计学意义(P<0.05)。在胶质瘤原位移植模型当中,As2O3联合CDDP能够明显延长荷瘤大鼠的生存期(与对照组相比,P<0.05)。结论三氧化二砷联合顺铂对胶质瘤细胞C6的增殖抑制作用,其机制可能是通过上调Caspase-3,下调IκB-α来抑制C6细胞的生长发育,促进其凋亡；并延长荷瘤大鼠的生存期。