论文部分内容阅读
目的：通过比较HMGB1及参与肿瘤浸润转移的关键性因子MMP-2、MMP-9、VEGF和ICAM-1在肝癌细胞和正常肝细胞中的表达差异，以探讨HMGB1在原发性肝细胞癌浸润转移中的作用，为进一步研究肝细胞癌发病机制提供理论依据。方法：采用实时荧光定量PCR法和Western-blot法从基因和蛋白水平分别检测HMGB1、RAGE、MMP-2、MMP-9、ICAM-1及VEGF在肝癌细胞HepG2和正常肝脏细胞L02中的表达情况；用ELISA检测MMP-2、MMP-9、ICAM-1及VEGF在HepG2和L02上清中的表达，用流式细胞仪检测在过氧化氢（200μmol/L）刺激0和24h后HepG2及L02的凋亡情况。结果：HMGB1、RAGE、MMP-2、MMP-9、ICAM-1及VEGF在肝癌细胞HepG2中的表达较正常肝细胞系L02高，培养基上清中的MMP-2、MMP-9、ICAM-1及VEGF亦高于正常肝细胞组。过氧化氢（200μmol/L）刺激24h后HepG2凋亡较L02凋亡少，有显著性差异（p<0.01）结论：HMGB1及与肿瘤浸润转移有关细胞因子MMP-2、MMP-9、VEGF、ICAM-1在肝癌细胞中的高表达，可能与肝细胞癌的发生发展有关；HMGB1还具有抗细胞凋亡作用。目的：第一部分研究表明HMGB1可能与肝细胞癌的浸润转移密切相关，但具体分子机制不明。本研究拟通过HMGB1体外刺激HepG2细胞后检测肿瘤细胞的增殖迁移能力和相关信号通路及关键蛋白的表达改变,初步探索HMGB1促进肿瘤浸润转移的可能机制，为进一步研究肝细胞癌提供新的理论依据。方法：100μg/L HMGB1及过氧化氢（200μmol/L）刺激HepG2细胞培养0和24h，用流式法测细胞凋亡情况，细胞周期变化；分别用含HMGB1（100μg/L）及不含HMGB1的无血清培养基培养HepG2细胞24h后用TranswellTM小室检测HepG2细胞迁徙情况。运用软琼脂克隆形成实验（Soft agar）测定加入HMGB1（100μg/L）前后HepG2细胞克隆形成情况；用Western-blot和实时荧光定量PCR法测定加入HMGB1刺激HepG2细胞24h后MMP-2、MMP-9、VEGF和ICAM-1的表达变化；用ELISA测定HepG2细胞培养上清中MMP-2，MMP-9，ICAM-1和VEGF的变化。用MTS试剂盒测定加入HMGB1（100μg/L）后HepG2细胞在0、6、12、24、36、48和72h的增殖情况。结果：流式结果表明过氧化氢刺激后HMGB1组及对照组均有凋亡产生，但HMGB1组凋亡明显较对照组低；TranswellTM小室检测结果显示HepG2细胞具有迁移能力，而HMGB1刺激后HepG2细胞迁移能力明显增强(p<0.01)；Soft agar实验结果显示，HMGB1刺激后共培养的HepG2细胞的克隆形成能力明显较对照组增加(p<0.01)。实时荧光定量PCR和Western-blot结果均提示HMGB1刺激HepG2细胞后，MMP-2、MMP-9、VEGF和ICAM-1的表达增强，与刺激前相比差异具有显著性(p<0.01)，并且培养液上清中MMP-2、MMP-9、VEGF和ICAM-1的表达随HMGB1刺激而增高。HMGB1刺激的HepG2细胞从36h开始细胞增殖明显高于未刺激组。结论:HMGB1体外刺激HepG2细胞能够上调肿瘤浸润相关通路因子的表达，且上调的因子表达与HepG2侵袭性呈正相关，与凋亡呈负相关；HMGB1在肝细胞癌中可能与肿瘤细胞的增殖及迁移能力密切相关。