【摘 要】
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目的：研究血小板激活因子(Platelet Activating Factor，PAF)诱导H9c2心肌细胞凋亡作用及其相关作用机制。
方法：(1)MTT比色实验对不同浓度的PAF作用2h的H9c2心肌细胞进行细
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目的：研究血小板激活因子(Platelet Activating Factor，PAF)诱导H9c2心肌细胞凋亡作用及其相关作用机制。
方法：(1)MTT比色实验对不同浓度的PAF作用2h的H9c2心肌细胞进行细胞活力检测，并进一步检测预先使用BN52021，WEB2170，BAPTA/AM或SB203580作用2小时后，21μmol/L PAF对H9c2心肌细胞活力的影响；(2)TUNEL法对对照组(无PAF)，0.2μnol/LPAF组，2μmol/L PAF组，和20μmol/LPAF组的H9c2心肌细胞进行凋亡检测，及预先使用BN52021或BAPTA/AM或SB203580作用于H9c2心肌细胞2小时后再加入2μmol/L PAF的细胞凋亡变化；并使用透射电镜观察各组H9c2心肌细胞形态学改变；(3)激光扫描共聚焦显微镜观察对照组(无PAF)，0.2μmol/LPAF组，2μmol/LPAF组，和20μmol/LPAF组的H9c2心肌细胞内钙离子的变化及PAF受体拮抗剂BN52021和WEB2170对该变化的影响；(4)CaspACETM检测系统检测2μmol/LPAF作用后的H9c2心肌细胞的Caspase-3活性；并检测预先使用BN52021或BAPTA/AM或SB203580作用2小时后，2μmol/L PAF处理H9c2心肌细胞的Caspase-3活性；(5)Westernblotting检测在2μmol/L PAF作用0h、0.5h、1h、2h时间点H9c2心肌细胞的ERK，JNK和p38活性变化。
结果：第一，0.2、2、20μmol/L的PAF作用后的H9c2心肌细胞具有明显的细胞凋亡特征，并且这种凋亡作用可被BN52021(PAF受体拮抗剂)和BAPTA/AM(细胞内钙螯合剂)抑制。第二，PAF处理的细胞中p38-MAPK和Caspase-3的活性增强，ERK和JNK的活性没有变化。而PAF增强Caspase-3活性作用可被BAPTA/AM或SB203580(p38抑制剂)抑制。第三，SB203580抑制PAF诱导的细胞凋亡作用及线粒体内细胞色素c的释放，同时PAF增强p38活性作用可以被BAPTA/AM减弱。
结论：PAF能够诱导H9c2心肌细胞凋亡，作用机制为PAF及其受体通过钙依赖的p38 MAPK激活细胞色素C/Caspase-3信号途径导致H9c2心肌细胞凋亡。
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