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本研究通过RACE-PCR技术首次在淡水珍珠育珠蚌(贝)池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)中获得IκBα和c-Rel的cDNA序列，分别命名为HsIκBα和Hsc-Rel。
HsIκBα的cDNA全长为1783bp，其开放阅读框(Open reading frame，ORF)为1083bp，编码360个氨基酸。Hsc-Rel的cDNA为2414bp，ORF为2298bp，编码765个氨基酸。通过生物信息学分析，发现HsIκBα蛋白分子量为40.08kDa，等电点为4.86，含有6个锚蛋白重复结构域(Ankyrin repeat domain，ANK)，亮氨酸(Leu)含量最高，色氨酸(Trp)含量最低；Hsc-Rel蛋白分子量为86.75kDa，等电点为6.38，含有Rel结构域(Rel homology domain，RHD)和转录激活域(Transcription activation domain，TAD)，丝氨酸(Ser)含量最高，色氨酸(Trp)含量最低。HsIκBα和Hsc-Rel二级结构的预测结果和三级结构的预测结果一致。同源性比对分析，表明HsIκBα同其他软体动物的同源性超过39%，Hsc-Rel同其他鱼类的同源性超过24%。系统进化树分析，HsIκBα与其他软体动物聚为一支，Hsc-Rel单独为一支，不与鱼类和哺乳动物聚为一支。
为了探究HsIκBα、Hsc-Rel是否参与免疫应答，通过脂多糖诱导发现，在0h时，HsIκBα和Hsc-Rel在所有组织都有表达，且都在肝胰腺的表达量最高，在血细胞的表达量最低。在6h时，HsIκBα在8个组织中和Hsc-Rel在7个组织中的表达水平都出现下调；在12h时，HsIκBα在所有组织的表达水平都上调，Hsc-Rel只有血细胞、心脏、肝胰腺、肠的表达水平出现上调；在24h时，HsIκBα在所有组织都下调，Hsc-Rel都上调(肾脏除外)；在36-72h，HsIκBα和Hsc-Rel部分组织的表达水平逐渐恢复到基础水平。以上结果表明，HsIκBα和Hsc-Rel随着LPS的诱导时间其表达量产生变化，从而参与免疫应答反应，且可能存在应答LPS的NF-κB通路。
为了探究HsIκBα和Hsc-Rel-RHD之间是否相互作用，进行GSTpull-down实验和双分子荧光互补实验。GSTpull-down实验中，SDS-PAGE和westernblot的结果表明HsIκBα-ORF-GST蛋白和Hsc-Rel-RHD-His蛋白能发生相互作用。双分子荧光互补实验的结果表明HsIκBα-ORF-VC155蛋白和Hsc-Rel-RHD-VN155蛋白相互作用，从而表明HsIκBα和Hsc-Rel-RHD能发生直接的相互作用。
为进一步探索HsIκBα对Hsc-Rel是否有调控作用，通过RNA干扰沉默HsIκBα，对Hsc-Rel产生的mRNA的变化。以HsIκBα-siRNA1188作为筛选成功的干扰链，检测HsIκBα在肝胰腺的mRNA表达水平，结果显示：HsIκBα的表达水平在第2d下降到0.60倍；第6d下降到0.50倍；第10d下降到0.39倍，表明成功干扰HsIκBα。同时，分别检测Hsc-Rel在肝胰腺的mRNA表达水平，结果显示：Hsc-Rel的表达水平在第2d上升到1.51倍；第6d上升到1.97倍；第10d上升到2.05倍。表明HsIκBα对Hsc-Rel具有负反馈调节作用。
本研究首次在池蝶蚌中克隆并鉴定了HsIκBα、Hsc-Rel基因，通过LPS诱导实验证明HsIκBα、Hsc-Rel参与免疫应答。通过GSTpull-down和双分子荧光互补实验，证明HsIκBα和Hsc-Rel-RHD存在直接的相互作用，并且进一步通过RNA干扰实验，表明HsIκBα对Hsc-Rel具有负反馈调节作用，这对后续探究池蝶蚌中NF-κB通路的具体机制提供一定的基础。
HsIκBα的cDNA全长为1783bp，其开放阅读框(Open reading frame，ORF)为1083bp，编码360个氨基酸。Hsc-Rel的cDNA为2414bp，ORF为2298bp，编码765个氨基酸。通过生物信息学分析，发现HsIκBα蛋白分子量为40.08kDa，等电点为4.86，含有6个锚蛋白重复结构域(Ankyrin repeat domain，ANK)，亮氨酸(Leu)含量最高，色氨酸(Trp)含量最低；Hsc-Rel蛋白分子量为86.75kDa，等电点为6.38，含有Rel结构域(Rel homology domain，RHD)和转录激活域(Transcription activation domain，TAD)，丝氨酸(Ser)含量最高，色氨酸(Trp)含量最低。HsIκBα和Hsc-Rel二级结构的预测结果和三级结构的预测结果一致。同源性比对分析，表明HsIκBα同其他软体动物的同源性超过39%，Hsc-Rel同其他鱼类的同源性超过24%。系统进化树分析，HsIκBα与其他软体动物聚为一支，Hsc-Rel单独为一支，不与鱼类和哺乳动物聚为一支。
为了探究HsIκBα、Hsc-Rel是否参与免疫应答，通过脂多糖诱导发现，在0h时，HsIκBα和Hsc-Rel在所有组织都有表达，且都在肝胰腺的表达量最高，在血细胞的表达量最低。在6h时，HsIκBα在8个组织中和Hsc-Rel在7个组织中的表达水平都出现下调；在12h时，HsIκBα在所有组织的表达水平都上调，Hsc-Rel只有血细胞、心脏、肝胰腺、肠的表达水平出现上调；在24h时，HsIκBα在所有组织都下调，Hsc-Rel都上调(肾脏除外)；在36-72h，HsIκBα和Hsc-Rel部分组织的表达水平逐渐恢复到基础水平。以上结果表明，HsIκBα和Hsc-Rel随着LPS的诱导时间其表达量产生变化，从而参与免疫应答反应，且可能存在应答LPS的NF-κB通路。
为了探究HsIκBα和Hsc-Rel-RHD之间是否相互作用，进行GSTpull-down实验和双分子荧光互补实验。GSTpull-down实验中，SDS-PAGE和westernblot的结果表明HsIκBα-ORF-GST蛋白和Hsc-Rel-RHD-His蛋白能发生相互作用。双分子荧光互补实验的结果表明HsIκBα-ORF-VC155蛋白和Hsc-Rel-RHD-VN155蛋白相互作用，从而表明HsIκBα和Hsc-Rel-RHD能发生直接的相互作用。
为进一步探索HsIκBα对Hsc-Rel是否有调控作用，通过RNA干扰沉默HsIκBα，对Hsc-Rel产生的mRNA的变化。以HsIκBα-siRNA1188作为筛选成功的干扰链，检测HsIκBα在肝胰腺的mRNA表达水平，结果显示：HsIκBα的表达水平在第2d下降到0.60倍；第6d下降到0.50倍；第10d下降到0.39倍，表明成功干扰HsIκBα。同时，分别检测Hsc-Rel在肝胰腺的mRNA表达水平，结果显示：Hsc-Rel的表达水平在第2d上升到1.51倍；第6d上升到1.97倍；第10d上升到2.05倍。表明HsIκBα对Hsc-Rel具有负反馈调节作用。
本研究首次在池蝶蚌中克隆并鉴定了HsIκBα、Hsc-Rel基因，通过LPS诱导实验证明HsIκBα、Hsc-Rel参与免疫应答。通过GSTpull-down和双分子荧光互补实验，证明HsIκBα和Hsc-Rel-RHD存在直接的相互作用，并且进一步通过RNA干扰实验，表明HsIκBα对Hsc-Rel具有负反馈调节作用，这对后续探究池蝶蚌中NF-κB通路的具体机制提供一定的基础。