【摘 要】
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已有的实验证据揭示，家蚕(Bombyx mori)等鳞翅目昆虫在蜕皮和变态期通过内源20-羟基蜕皮酮(20E)激素诱导幼虫组织发生细胞自噬和凋亡。在果蝇的研究表明，20E具有与饥饿信号相似
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已有的实验证据揭示，家蚕(Bombyx mori)等鳞翅目昆虫在蜕皮和变态期通过内源20-羟基蜕皮酮(20E)激素诱导幼虫组织发生细胞自噬和凋亡。在果蝇的研究表明，20E具有与饥饿信号相似的作用，能诱导或促进细胞发生自噬和凋亡，保幼激素(JH)能抑制或延迟自噬和凋亡的发生。但在鳞翅目昆虫，尚不清楚20E、JH和饥饿信号对细胞自噬和凋亡的作用是否与果蝇相似? 本文通过在家蚕5龄3天、5龄4天幼虫内源20E和JH滴度相对最低的时期，给予外源20E、JH激素处理和停食饥饿处理，以幼虫脂肪体、丝腺和中肠作为检测靶组织：(1)通过Lyso-tracker染色，检测细胞自噬体发生的溶酶体活性；(2)通过免疫组化，检测BmAtg8和BmBR-C、Caspase3分别作为自噬和凋亡标记蛋白的表达；(3)通过Western-blot，检测BmAtg5(34KD/24KD)和BmAtg6(60KD/50KD/37KD/35KD)作为自噬和凋亡分子开关蛋白的表达，由此初步分析20E、JH和饥饿处理后对家蚕幼虫组织(脂肪体、丝腺和中肠)发生细胞自噬和凋亡的作用，为今后深入研究家蚕等鳞翅目昆虫变态发育的自噬和凋亡机制提供实验证据。 本文获得的初步实验结果如下： (1)外源20E处理后导致幼虫发育异常，大部分发育到熟蚕W期后死亡，只有极少数能发育到化蛹1天(P24h)，化蛹2天(P48h)前后全部死亡。外源JH处理后导致超龄幼虫，并延长龄期至5L14D，进食减少甚至不进食，至中肠出现糜烂的状态，最终死亡。 (2)外源20E和饥饿信号将短暂快速诱导家蚕5龄幼虫脂肪体、丝腺和中肠组织发生细胞自噬和凋亡，即在处理后的第2天或至第3天，相关标记蛋白的表达信号明显上调，脂肪体自噬溶酶体活性增强。提示其结果与果蝇相同，20E具有与饥饿信号相似的作用，能诱导或促进幼虫组织发生细胞自噬和凋亡。 (3)外源JH信号在脂肪体和丝腺具有短暂诱导或者促进其细胞发生自噬的作用，即在处理后的第2天或至第3天，相关标记蛋白的表达信号明显上调，脂肪体自噬溶酶体活性增强，随后JH信号具有抑制其自噬但持续加强其凋亡的强度。 (4)外源JH信号处理后，在超龄幼虫前期(5L5D和5L9D-5L11D一对应于化蛹S36h-P1D)，对中肠具有抑制或者延迟细胞自噬和凋亡的作用。
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