【摘 要】
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本论文主要关注嗜碱菌Alkalimonas amylolytica N10中与盐碱相关的基因的克隆及在模式生物中的功能验证。具体研究如下: 1.根据N10蛋白质组学研究结果，有针对性的克隆了12
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本论文主要关注嗜碱菌Alkalimonas amylolytica N10中与盐碱相关的基因的克隆及在模式生物中的功能验证。具体研究如下: 1.根据N10蛋白质组学研究结果，有针对性的克隆了12个可能与盐碱相关的基因，以pUC18为载体，采用快速克隆试剂盒高效构建重组载体并在大肠杆菌K12中表达。 2.测定了野生菌及12株重组菌在不同盐浓度(0％，2％，4％，6％(w/v))和不同pH(8.0，8.5，9.0，9.5)下的生长情况，确定了后续实验中耐盐碱的筛选条件:NaCl浓度为6％(w/v)，pH为9.0。 3.测定了野生型E.coli K12，E.coli K12的基因缺陷株及将N10各基因导入对应缺陷体中的重组菌在含6％(w/v)NaCl的LB和pH为9的LB中的生长情况，结果显示atoB，pal，accA基因可提高大肠杆菌相应缺陷株的耐盐能力;ahpC，ahpF，atoB，atpD，gutQ，accA，pal可提高大肠杆菌相应缺陷株的耐碱能力。 4.初步探讨了pal有抗盐碱功能的机制。通过生长曲线测定，进一步验证了pal具有耐盐碱功能，且该功能具有一定普遍性。通过显微镜观察及SDS、万古霉素敏感性实验，证明pal影响大肠杆菌的细胞分裂及菌体外膜完整性，推测这正是该基因缺失的突变株不能耐盐碱的原因。 5.评价了accA基因对植物细胞耐盐碱性的影响。以pPZP111为载体，构建了植物细胞重组表达载体，通过农杆菌介导方法转入烟草BY-2悬浮细胞表达，利用FDA染色方法测定经盐碱溶液处理后残存的活细胞数量，结果显示转入此基因的烟草BY-2细胞，经盐碱溶液处理后，其存活细胞比例高于野生型。
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