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目的:研究雷帕霉素(rapamycin,RAPA)对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium cells,HRPECs)增殖和凋亡的影响。
方法:HRPECs传代培养,采用传代的3~5代细胞。观察不同浓度RAPA对HRPECs增殖和凋亡的影响时,实验分为:空白对照组:HRPECs;DMSO对照组:DMSO(0.1‰)+HRPECs;药物处理组:RAPA+DMSO(0.1‰)+HRPECs,其中药物处理组又根据RAPA浓度不同分为7组:5、10、20、40、80、160、320 nmol/L,以上各组均处理24 h;观察RAPA作用不同时间对HRPECs增殖和凋亡的影响时,对照组同上,药物处理组分为3、6、12、24、48 h,RAPA浓度均为80 nmol/L。应用四甲基唑蓝(MTT)比色法检测各组吸光度值,并计算不同浓度、不同时间条件下RAPA对HRPECs增殖的抑制率;应用Hoechst染色法检测不同时间、不同浓度条件下RAPA对HRPECs凋亡的影响。
结果:MTT法检测空白对照组、DMSO对照组和不同浓度RAPA组的吸光度值分别为:0.54±0.04、0.54±0.04、0.51±0.07、0.48±0.04、0.45±0.05、0.43±0.07、0.39±0.06、0.33±0.05、0.21±0.05。与空白对照组吸光度值相比,DMSO对照组和5 nmol/L组与其差异无统计学意义(P>0.05);10 nmol/L组与其差异有统计学意义(P<0.05);其他各浓度组与其有显著差异(P<0.01),各组对HRPECs抑制率分别为0、2.20%、5.55%、12.48%、17.04%、21.56%、27.91%、40.13%、60.52%。MTT法检测空白对照组、DMSO对照组和RAPA不同作用时间的吸光度值分别为0.56±0.07、0.56±0.04、0.53±0.03、0.49±0.05、0.46±0.05、0.43±0.05、0.33±0.05。与空白对照组吸光度值相比,DMSO对照组与其差异无统计学意义(P>0.05),其他各药物处理组与其都有显著差异(P<0.01),各组对HRPECs抑制率分别为0、1.52%、6.16%、12.39%、18.24%、24.22%、41.64%。Hoechst染色法检测空白对照组、DMSO对照组和RAPA不同时间组HRPECs凋亡情况时,各组细胞凋亡率(%)分别为:3.07±1.70、3.5±1.71、7.73±1.97、10.51±2.68、12.46±2.66、15.44±2.14、20.88±1.94。与空白组照组HRPECs的凋亡率相比,DMSO对照组与其差异无统计学意义(P>0.05),其他各药物处理组与其都有显著差异(P<0.01)。Hoechst染色法检测空白对照组、DMSO对照组和RAPA不同浓度组HRPECs凋亡情况时,各组细胞凋亡率(%)分别为:2.87±1.00、2.73±0.98、2.90±0.64、4.16±1.07、6.29±0.70、9.57±0.84、14.76±1.86、17.10±1.95、23.82±1.63,与空白组照组HRPECs的凋亡率相比,DMSO对照组、5、10 nmol/L组与其差异均无统计学意义(P>0.05),其他各药物处理组与其都有显著差异(P<0.01)。
结论:RAPA可以有效地抑制体外培养的HRPECs增殖,并且具有诱导其发生凋亡的作用。这两种作用都具有剂量和时间的依赖性。