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目的：研究咖啡因是否通过拮抗腺苷A1R削弱电针镇痛效应。
方法：
1.动物来源
从美国Jackson公司引进腺苷A1R基因敲除小鼠，doral-tmlb(KOMP)Wtsi/J，子代经过合笼繁殖出小鼠。采用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction ， PCR )扩增方法鉴定小鼠基因型，并筛选出实验所需要的腺苷A1R基因敲除小鼠(A1R-/-)与同窝野生型小鼠(A1R+/+)。
2.动物分组
将A1R+/+小鼠随机分为对照组、模型组、电针(Electroacupuncture,EA)组、咖啡因组、A1R激动剂(N6-cyclopentyladenosine，CPA)组、A1R拮抗剂(8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine，DPCPX)组；A1R-/-小鼠则随机分为对照组、模型组、电针组、咖啡因组；每组小鼠9只。
3.检测指标
①行为学指标：分别检测造模前后每组小鼠的机械缩足反射潜伏期(Paw mechanical withdrawal latency ， PMWL )、热甩尾反射潜伏期(Tail flick latency)和鼠爪肿胀度；②免疫荧光(Immunofluorescence staining，IF)：分别检测各种干预后背根神经节(Dorsal root ganglia，DRG)内A1R与前列腺酸性磷酸酶(Prostatic acid phosphatase，PAP)的表达。
4.干预措施
对照组：在小鼠右侧足底注射生理盐水溶液(20μl，0.9%，i.pl)；模型组：在小鼠右侧足底注射福尔马林溶液(20μl，1.5%，i.pl)，以小鼠足底出现肿胀，有白色透明小泡，不停舔足为造模成功；电针组：造模成功后对右侧环跳穴(GB 30)进行电针刺激(0.3 mA，15 Hz，10 min)；咖啡因组：腹腔注射咖啡因(10 mg/kg，i.p.)后进行造模，再予以电针治疗；CPA组：腹腔注射CPA(0.3mg/kg，i.p.)后进行造模，再予以电针治疗；DPCPX组：腹腔注射DPCPX(3 mg/kg，i.p.)后进行造模，再予以电针治疗。
结果:
1.行为学实验结果显示：
在机械痛与热甩尾实验中，与对照组(Control)小鼠相比，模型后A1R+/+小鼠与A1R-/-小鼠的机械痛与热甩尾潜伏期均显著降低，提示福尔马林诱导的急性炎症性疼痛模型小鼠造模成功。与模型组(Model)相比，EA与A1R激动剂CPA显著改善了模型后A1R+/+小鼠的机械痛与热甩尾潜伏期；A1R拮抗剂DPCPX和咖啡因没有改善模型后A1R+/+小鼠的机械痛与热甩尾潜伏期；EA与咖啡因干预也没有改善模型后A1R-/-小鼠的机械痛与热甩尾潜伏期。
在鼠爪肿胀度检测实验中，与Control组相比，模型后A1R+/+小鼠与A1R-/-小鼠的鼠爪肿胀度均显著升高，提示急性炎性痛造模成功。与Model组相比，EA与A1R激动剂CPA显著改善了模型后A1R+/+小鼠增加的鼠爪肿胀；咖啡因及A1R拮抗剂DPCPX对模型后A1R+/+小鼠的鼠爪肿胀也有显著改善；EA对A1R-/-模型小鼠的鼠爪肿胀也有显著改善，但EA没有改善咖啡因干预后的A1R-/-小鼠的鼠爪肿胀。
行为学结果提示：针刺能够显著改善急性炎性痛小鼠足底的机械痛、热痛及肿胀程度，其作用机制与腺苷A1R密切相关；咖啡因能够通过拮抗A1R功能，削弱针刺镇痛效应。
2.免疫荧光实验结果显示
在A1R+/+小鼠DRG染色中发现，与Control组相比，模型后小鼠DRG内的A1R、PAP及共表达阳性神经元个数均显著降低，提示模型后A1R与PAP均减少；与Model组相比，EA能够显著上调模型后小鼠的A1R水平，但对PAP表达无显著影响；A1R激动剂CPA能够显著上调模型后小鼠DRG神经元A1R及PAP表达水平；A1R拮抗剂DPCPX与咖啡因对模型后小鼠的A1R及PAP表达无显著影响。
在A1R-/-小鼠DRG染色中发现，与Control组相比，模型后小鼠DRG内的PAP阳性神经元个数降低，提示模型后PAP减少；与Model组相比，EA与咖啡因均未改变模型后小鼠的PAP阳性神经元个数。
免疫荧光结果提示：EA能够显著改善急性炎性痛A1R+/+小鼠DRG内A1R表达的减少；咖啡因能够通过拮抗A1R，削弱EA后小鼠DRG中A1R表达的升高。
结论:
1)EA能够通过上调DRG中A1R表达，改善急性炎性痛模型小鼠的机械痛、热痛与鼠爪肿胀；
2)咖啡因能够通过拮抗DRG中A1R表达，削弱EA对急性炎性痛模型小鼠的镇痛效应。
方法：
1.动物来源
从美国Jackson公司引进腺苷A1R基因敲除小鼠，doral-tmlb(KOMP)Wtsi/J，子代经过合笼繁殖出小鼠。采用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction ， PCR )扩增方法鉴定小鼠基因型，并筛选出实验所需要的腺苷A1R基因敲除小鼠(A1R-/-)与同窝野生型小鼠(A1R+/+)。
2.动物分组
将A1R+/+小鼠随机分为对照组、模型组、电针(Electroacupuncture,EA)组、咖啡因组、A1R激动剂(N6-cyclopentyladenosine，CPA)组、A1R拮抗剂(8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine，DPCPX)组；A1R-/-小鼠则随机分为对照组、模型组、电针组、咖啡因组；每组小鼠9只。
3.检测指标
①行为学指标：分别检测造模前后每组小鼠的机械缩足反射潜伏期(Paw mechanical withdrawal latency ， PMWL )、热甩尾反射潜伏期(Tail flick latency)和鼠爪肿胀度；②免疫荧光(Immunofluorescence staining，IF)：分别检测各种干预后背根神经节(Dorsal root ganglia，DRG)内A1R与前列腺酸性磷酸酶(Prostatic acid phosphatase，PAP)的表达。
4.干预措施
对照组：在小鼠右侧足底注射生理盐水溶液(20μl，0.9%，i.pl)；模型组：在小鼠右侧足底注射福尔马林溶液(20μl，1.5%，i.pl)，以小鼠足底出现肿胀，有白色透明小泡，不停舔足为造模成功；电针组：造模成功后对右侧环跳穴(GB 30)进行电针刺激(0.3 mA，15 Hz，10 min)；咖啡因组：腹腔注射咖啡因(10 mg/kg，i.p.)后进行造模，再予以电针治疗；CPA组：腹腔注射CPA(0.3mg/kg，i.p.)后进行造模，再予以电针治疗；DPCPX组：腹腔注射DPCPX(3 mg/kg，i.p.)后进行造模，再予以电针治疗。
结果:
1.行为学实验结果显示：
在机械痛与热甩尾实验中，与对照组(Control)小鼠相比，模型后A1R+/+小鼠与A1R-/-小鼠的机械痛与热甩尾潜伏期均显著降低，提示福尔马林诱导的急性炎症性疼痛模型小鼠造模成功。与模型组(Model)相比，EA与A1R激动剂CPA显著改善了模型后A1R+/+小鼠的机械痛与热甩尾潜伏期；A1R拮抗剂DPCPX和咖啡因没有改善模型后A1R+/+小鼠的机械痛与热甩尾潜伏期；EA与咖啡因干预也没有改善模型后A1R-/-小鼠的机械痛与热甩尾潜伏期。
在鼠爪肿胀度检测实验中，与Control组相比，模型后A1R+/+小鼠与A1R-/-小鼠的鼠爪肿胀度均显著升高，提示急性炎性痛造模成功。与Model组相比，EA与A1R激动剂CPA显著改善了模型后A1R+/+小鼠增加的鼠爪肿胀；咖啡因及A1R拮抗剂DPCPX对模型后A1R+/+小鼠的鼠爪肿胀也有显著改善；EA对A1R-/-模型小鼠的鼠爪肿胀也有显著改善，但EA没有改善咖啡因干预后的A1R-/-小鼠的鼠爪肿胀。
行为学结果提示：针刺能够显著改善急性炎性痛小鼠足底的机械痛、热痛及肿胀程度，其作用机制与腺苷A1R密切相关；咖啡因能够通过拮抗A1R功能，削弱针刺镇痛效应。
2.免疫荧光实验结果显示
在A1R+/+小鼠DRG染色中发现，与Control组相比，模型后小鼠DRG内的A1R、PAP及共表达阳性神经元个数均显著降低，提示模型后A1R与PAP均减少；与Model组相比，EA能够显著上调模型后小鼠的A1R水平，但对PAP表达无显著影响；A1R激动剂CPA能够显著上调模型后小鼠DRG神经元A1R及PAP表达水平；A1R拮抗剂DPCPX与咖啡因对模型后小鼠的A1R及PAP表达无显著影响。
在A1R-/-小鼠DRG染色中发现，与Control组相比，模型后小鼠DRG内的PAP阳性神经元个数降低，提示模型后PAP减少；与Model组相比，EA与咖啡因均未改变模型后小鼠的PAP阳性神经元个数。
免疫荧光结果提示：EA能够显著改善急性炎性痛A1R+/+小鼠DRG内A1R表达的减少；咖啡因能够通过拮抗A1R，削弱EA后小鼠DRG中A1R表达的升高。
结论:
1)EA能够通过上调DRG中A1R表达，改善急性炎性痛模型小鼠的机械痛、热痛与鼠爪肿胀；
2)咖啡因能够通过拮抗DRG中A1R表达，削弱EA对急性炎性痛模型小鼠的镇痛效应。