大豆的遗传转化及转基因株系的抗逆性分析

• 作 者: 林秀云
• 机 构: 华南农业大学
• 出 处: 华南农业大学
• 发表日期: 2012年期
• 关键词: 大豆 遗传转化 转基因株系 抗逆性 GUS染色法

大豆(Glycine max L.)起源于中国，是一种非常重要的农作物。它是人类主要植物性蛋白来源之一，也是重要的家畜饲料和工业原料。本论文以华春3号(HC3)，华夏3号(HX3)大豆为转化材料，优化了农杆菌介导的大豆转化体系，分析了过量表达MfGolS转基因大豆株系的抗逆性。主要研究结果如下：　　(1)利用GUS染色法确定优化了侵染和共培养方法。　　直接用菌液侵染外植体的转化率明显高于浸染时附加超声波(15 min)和多胺(5mmol/L)处理的转化率；将侵染后的外植体直接插入共培养基进行共培养，其转化率会大大增加；将原始的摇动侵染与静止侵染进行染色比较，结果摇动侵染的转化率低于静止侵染。确定最佳侵染与共培养方法为：静止条件下，用菌液直接侵染外植体，之后把外植体直接插入共培养基培养。　　(2)农杆菌介导的大豆遗传转化　　以HC3和HX3大豆为材料，利用农杆菌介导法，将COR1基因和NCED-ALO基因分别转入大豆子叶节，最终获得再生植株，经过分子检测，所得到的植株全部为阴性植株。　　(3)转MfGolS基因大豆的抗逆性分析　　除草剂300 mg/L Basta处理后，野生型大豆的叶片出现明显黄斑并褐化死亡，而转基因大豆的叶片较少受到伤害。　　6℃低温处理14 d，野生型植株出现萎蔫，其最大光化学效率为0.664，而转基因大豆的最大光化学效率均为0.730以上，明显高于野生型；转基因大豆的相对电导率最大值为42.9％，而野生型大豆为60.6％；野生型大豆的叶绿素含量也明显低于转基因大豆。这些结果说明过量表达MfGolS能够增强植株的抗冷性。　　干旱处理7 d后，野生型植株出现萎蔫，并且在处理后期大部分植株死亡，复水后存活率远远低于转基因植株。测定野生型大豆与转基因大豆的最大光化学效率值相近，但野生型大豆相对电导率却明显高于转基因大豆而相对含水量低于转基因大豆。说明过量表达MfGolS增强了植株的抗旱性。　　盐胁迫处理14 d后，野生型植株最先出现萎蔫，并且最大光化学效率和叶绿素含量明显低于转基因大豆；同时，野生型大豆的相对电导率要明显高于转基因植株。说明过量表达MfGolS能够增强植株的抗盐性。