【摘 要】
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钩端螺旋体病（简称钩体病，Leptospirosis）是由致病性钩端螺旋体引起的一种广泛的人兽共患病。钩体病多发于气候潮湿的热带和亚热带发展中国家，我国也是受钩体病危害较多的国家之
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钩端螺旋体病（简称钩体病，Leptospirosis）是由致病性钩端螺旋体引起的一种广泛的人兽共患病。钩体病多发于气候潮湿的热带和亚热带发展中国家，我国也是受钩体病危害较多的国家之一，故将其列为乙类法定传染病。钩体病的临床症状多变，鉴别诊断较为困难。随着我国科学家对致病性钩端螺旋体赖型赖株的测序完成，以及对钩体基因组和蛋白质组研究的进一步深入。人们发现钩体菌外膜蛋白LipL32可能是问号钩端螺旋体各血清群的共同抗原之一。本研究旨在得到纯化后的LipL32，将其包被在ELISA板上，以检测其作为诊断性抗原的敏感度和特异度。首先从钩体基因组序列中找到LipL32对应的基因片段。设计引物并利用PCR技术将目的片段扩增出来。经过琼脂糖电泳纯化的目的片段和质粒pET28进行重组。然后导入大肠杆菌BL21，并诱导其表达。我们用纯化得到的LipL32抗原对来自湖南和安徽的92份血清进行了检测。同时，使用MAT（暗视野显微镜凝集试验）、全菌ELISA和Leptotek Dri-Dot快速诊断试剂盒进行了对比检测。
2005年，本研究对湖南省和安徽省的钩体病易感人群进行选择性筛查过程中，共收集到92份血清。利用MAT标准方法得到的结果是，35份阳性和57份阴性。Leptotek Dri-Dot快速诊断试剂盒和该结果完全吻合。用纯化得到的LipL32蛋白检测结果为40份阳性和52份阴性。而全菌ELISA的检测结果为36份阳性和56份阴性。在钩体病的疫情监测和选择性筛检过程中，我们统一以MAT的检测结果为标准。由此我们可以计算出LipL32 ELISA检测方法的敏感度为97.14％，特异度为89.47％，约登指数为0.86。全菌ELISA检测方法的敏感度为88.57％，特异度为91.22％，约登指数为0.80。
由以上的筛检评价结果，我们可以看出新使用的LipL32 ELISA方法，比全菌ELISA的检测效率有所提高，其约登指数高于后者。这是因为经过纯化的LipL32是和血清抗体反应过程中起作用的关键蛋白。而全菌抗原的制作过程粗糙，包涵蛋白诸多而且杂乱，在和血清抗体反应时可能会削弱免疫反应的特异性。但是与金标准MAT的检测结果比较，LipL32 ELISA的检测效率偏低。出现1例假阴性，6例假阳性。这可能是因为在钩体菌感染人体过程中起作用的蛋白不止一个<［13］>，纯化的单一蛋白不足以反应各菌群的多种抗体。我们可以进一步纯化出其余的关键蛋白，将它们很好的融合在ELISA板上，以提高该检测方法的真实性。从而建立一个快速、简便的钩体病现场筛检方法。
目的：对经典的钩端螺旋体病MAT（显微镜凝集试验）方法进行标准化，以提高其检测结果的可靠性、便于今后不同实验室之间MAT检测结果的对比分析。
方法：参照世界卫生组织/国际钩端螺旋体病协会（WHO/ILS）新近推荐的MAT操作步骤，对我国MAT实验中的各个环节，包括培养基制备、菌体浓度、抗原制备、血清灭活方法、抗原抗体作用时间与温度，以及结果判定标准等进行标准化。结果用标准化MAT方法检测WHO/ILS寄送的考核盲样（编号A、B、C、D、E），每份样本重复检测三次，获得的实验结果完全一致。
检测结果报送WHORLS后，反馈结果表明：5份样本检测的血清群结果完全准确，抗体滴度与标准结果吻合。结论钩端螺旋体病MAT实验经标准化后，检测结果稳定可靠，在国际性评测中能准确地鉴定出钩端螺旋体血清抗体的血清群及滴度。标准化方法的应用可提高我国钩体病血清学监测水平。
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