人血清白蛋白荧光探针的研发与生物学应用

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:suitky
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背景:人血清白蛋白是血浆中含量最丰富的蛋白质,约占到血浆中蛋白总量的50-60%。人血清白蛋白在维持人体健康中发挥着不可替代的重要作用。白蛋白由肝脏合成并快速释放到血中,健康成人血中白蛋白的正常值范围为35-55 g/L。但多种疾病都会导致血清白蛋白的水平下降。因此,人血中白蛋白的定量测定被广泛用于临床相关疾病的诊断。因此,准确评判血浆白蛋白浓度对于临床应用意义重大。目的:开发一种准确度高,检测灵敏,受环境干扰小,生物兼容性好、操作简单、成本低的白蛋白荧光探针(E)-1-(2-二氰基甲烯基-3-氰基-5,5-二甲基呋喃)-2-(4-氨基苯基)-乙烯,简称ACDM,并对其进行生物学评价并应用于生物样品的检测。方法:(1)对ACDM的化学及物理稳定性(包括pH、有机溶剂、温度及结合速度等)进行考证;(2)ACDM的蛋白选择性及对内源与外源性物质的抗干扰性测定;(3)通过已知药物替代法和jobs plot方法对ACDM与白蛋白结合位点的预测,并运用分子对接和分子动力学确定;(4)测定实际生物样品:28例正常人血浆和HepG2细胞产白蛋白的定量,并通过BCG方法和蛋白组学方法进行对照确认。结果:(1)最佳反应pH为8.0,有机溶剂DMSO用量为1%,ACDM终浓度为20μM,温度保持室温下操作,体系反应3s即可;(2)ACDM只对白蛋白产生荧光值响应,并且抗干扰性很稳定;(3)确认ACDM在白蛋白上的结合位点为非药物位点;(4)所测得血浆及细胞产白蛋白的含量与对照方法一致。结论:ACDM是一个结合迅速、高选择性、高灵敏性及抗干扰性强的白蛋白探针,并且可以检测复杂生物样品,其检测结果准确且高度可信;可用于临床白蛋白检测及相关疾病的诊断和预后。
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