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分子生物学的诞生及其在猪育种中的应用,为猪遗传育种提供了新的契机。猪高密度基因图谱的建立、对基因的结构、功能以及基因与性状关系等的充分了解,是未来动物分子育种的主要依据。生物信息学的发展和大量公共数据库的共享,为分离、定位基因提供了新的思路。本论文根据猪EST信息和比较基因组策略,分离鉴定了猪的五个基因,取得了如下的结果: 1.依据人cDNA信息获得的猪EST所构建的EST重叠群设计的猪特异引物,从湖北白猪基因组中分离克隆了五个猪基因片段。将其中分离的三个醛缩酶同工酶基因(ALDOA、ALDOB和ALDOC)片段提交GenBank数据库,获GenBank收录号,分别为AY359812、AY359813和AY359811。分离的其余两个基因为硒蛋白P基因(SEPP1)和CT120膜蛋白基因(CT120)。并经过同源序列鉴定,发现预测的ALDOA、ALDOB、ALDOC、SEPP1和CT120外显子部分与相应的人的cDNA核苷酸序列的相似性分别为93%、92%、93%、88%和86%。将这些分离的片段鉴定为猪的ALDOA、ALDOB、ALDOC、SEPP1和CT120基因片段。 2.利用辐射杂种板技术对五个基因进行了染色体精细定位。这五个基因均与猪第一张全基因组辐射杂种图谱的标记紧密连锁(LOD>6)。ALDOA基因与SW1443紧密连锁(LOD=6.12),ALDOB基因与SSC1F12紧密连锁(LOD=17.58),ALDOC基因与SWC23紧密连锁(LOD=10.8),SEPP1基因与S0077紧密连锁(LOD=8.85),CT120基因与S0106紧密连锁(LOD=11.06)。 3.在分离的SEPP1基因中发现了第2内含子的KpnI—RFLP(T-G)和VspI—RFLP(T-C)多态位点;在分离的CT120基因中发现了第4内含子的MspI—RFLP(A-G)多态位点。采用PCR—RFLP分析技术,检测了不同群体中SEPP1基因2个位点和CT120基因1个位点的多态性,计算了3个位点的基因型频率和基因频率,分析了各基因型在不同猪群中的分布差异。 4.在长白(?)×(大白×通城)♀和大白(?)×(长白×通城)早的上下代个体中分析了SEPP1的KpnI—RFLP和CT120的MspI—RFLP位点的遗传方式,结果表明均呈共显性遗传方式。 5.在本室与通城县畜牧局种畜场合作所建立的试验群体(含通城、长大通、大长通、长白和大白猪群)中分析了CT120第4内含子MspI—RFLP位点的多态性,利用SAS8.2中的一般线性模型程序分析了CT120基因与部分免疫性状和生产性状华中农业大学2004届硕士学位论文的关联,初步研究的结果发现该基因第4内含子的人试,I一”LP位点与平均背膘厚极显著相关(P<0.01),最小二乘均数的两两比较发现AA等位基因型个体的平均背膘厚比GG型低,达到极显著水平(P<0.01),AA等位基因型个体的平均背膘厚也显著低于AG型(P<0.05)。 6.以鄂西黑猪的肝、肺、’肾、脾和心脏组织作为研究材料,利用半定量Rl’- PCR研究猪义护尸了基因在各组织的表达谱和表达规律,结果发现该基因在这上述五种组织中均表达,但在肝中的表达丰度最高。