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本文包括两部分研究:
1、研究了5L发酵的批次发酵(batch)方式,掌握了发酵过程中碳源耗尽的时间。比较了5L发酵罐中补料分批发酵(fed-batch)的两种发酵策略:比生长速率(ц)控制模式和DO-stat-ц控制模式。结果表明,ц控制模式比DO-stat-ц控制模式更有优势。Ц控制模式的产量达790mg/l,高于DO-stat-ц控制模式的660mg/l的产量。而且ц控制模式消耗的甘油补料液也比较少。所以ц控制模式对CNB的5L发酵罐更适合。由于溶氧(DO)的限制,CNB的高细胞密度培养(HCDC)在现有条件下较难实现。
利用ц控制模式进行了50L发酵实验。CNB在发酵中期有表达,但是到发酵后期被蛋白水解活性所分解。因此50L发酵条件需要继续优化。
2、利用已经建立的CNB纯化技术纯化了八种CNB突变体的蛋白,并用于药理,药效和检测实验。