论文部分内容阅读
背景糖尿病肾病(DN)是临床上常见的糖尿病微血管并发症之一,约30%-40%的糖尿病患者伴有不同程度肾脏的损伤,严重影响患者的生活质量。胰高血糖素样肽1(GLP-1)类似物是近年来运用于临床治疗糖尿病的一种新型药物,通过与其高亲和力受体(GLP-1R)结合,能够促进胰岛素分泌、降低胰高血糖素分泌,同时延缓胃排空、增强饱食感、抑制食欲、增加肝糖原合成、减少肝糖原分解等发挥降低血液中葡萄糖浓度的作用。GLP-1Rs广泛存在于肾脏、心脏、肝脏等身体重要器官。近年来,大量研究表明GLP-1类似物在DN的发病过程中可通过减少炎症反应、抑制氧化应激、改善晚期糖末终基化产物(AGEs)等多个方面起到除降糖作用外的肾脏保护作用。目前已在我国上市应用的GLP-1类似物有利拉鲁肽(liraglutide)和艾塞那肽(exenatide)两种。利拉鲁肽和艾塞那肽都可通过与GLP-1R结合延缓DN的发展,但两者的合成来源、代谢途径均不相同,两者在DN患者中应用的效果是否存在差异尚不清楚。目的探讨验证GLP-1类似物治疗DN的作用机制;对比利拉鲁肽与艾塞那肽在DN发病过程中的对肾脏结构和功能的保护作用是否存在差异。方法健康的雄性SD大鼠50只,完全随机分出正常对照组(10只),另外40只大鼠饲以高糖高脂饲料6周诱导胰岛素抵抗,联合空腹腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)破坏胰岛β细胞,形成胰岛素抵抗伴胰岛素分泌相对不足为特征的2型糖尿病,之后3天、7天各测一次晨空腹尾静脉血糖,两次血糖均≥16.9 mmol/L为DN模型成立。成模大鼠32只随机分为模型组(10只)、利拉鲁肽治疗组(11只)和艾塞那肽治疗组(11只)。正常对照组和模型组大鼠予皮下注射生理盐水(10μL/Kg/12h);利拉鲁肽治疗组大鼠予皮下注射利拉鲁肽(0.3 mg/Kg/12h);艾塞那肽治疗组大鼠予皮下注射艾塞那肽(10μL/Kg/12h),共给药8周。第8周末采集大鼠血液标本,肾脏标本。新鲜血液标本离心后收集血清,之后使用全自动生化分析仪测定大鼠BUN和Scr水平;肾脏标本制作成蜡块,采用HE染色和过碘酸雪夫染色(PAS)观察肾脏组织结构变化;免疫组织化学法检测大鼠肾脏组织中TGF-β1和NOX 4的蛋白水平表达并使用Image-pro Plus软件对TGF-β1和NOX 4在肾脏组织中蛋白水平表达进行半定量分析;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)定量分析各组肾脏组织中TGF-β1和NOX 4的mRNA水平表达情况。采用SPSS 19.0软件进行统计分析,所有计量资料结果采用均数±标准差(x±s)表示。多组间比较采用单因素方差分析,2组间比较采用t检验,检验水准α=0.05。结果与正常对照组比较,模型组和艾塞那肽治疗组大鼠空腹血糖、BUN、Scr及肾组织中TGF-β1、NOX 4蛋白水平均显著升高(P<0.05);利拉鲁肽治疗组大鼠空腹血糖和肾组织中TGF-β1蛋白水平显著升高(P<0.05);模型组、利拉鲁肽治疗组和艾塞那肽治疗组大鼠体质量显著降低(P<0.05),肾组织形态学均显示肾小球系膜明显增厚,其中模型组增厚最明显,利拉鲁肽治疗组最轻。与模型组比较,利拉鲁肽治疗组和艾塞那肽治疗组大鼠BUN、Scr水平显著降低(P<0.05);利拉鲁肽治疗组大鼠肾组织中TGF-β1、NOX 4蛋白水平和mRNA水平显著降低(P<0.05);艾塞那肽治疗组大鼠肾组织中TGF-β1、NOX 4蛋白水平和TGF-β1 m RNA水平显著降低(P<0.05)。利拉鲁肽治疗组大鼠Scr和肾组织中TGF-β1、NOX 4蛋白水平和m RNA水平显著低于艾塞那肽治疗组(P<0.05)。结论1.GLP-1类似物可降低肾脏组织TGF-β1、NOX 4蛋白水平和mRNA水平的表达,降低DN大鼠BUN、Scr水平,延缓大鼠DN的发展;2.DN大鼠短期内使用GLP-1类似物,利拉鲁肽较艾塞那肽能够更好的减少DN模型大鼠肾脏组织中TGF-β1、NOX 4蛋白和mRNA水平的表达,获得更低的BUN、Scr水平。