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由于受多种因素的综合影响，育龄期女性早期复发性流产(recurrent spontaneous abortion，RSA)的发病率有逐渐升高的趋势。目前，仍有近50％的自然流产原因不明。近年来研究发现，血栓前状态与不明原因的复发性流产具有相关性。血栓前状态(prcthrombotic state，PTS)是由于某些先天或获得性因素，使机体易于形成血栓的凝血系统功能紊乱的状态，这种状态尚未达到形成血栓的程度，或者形成的少量血栓正处于溶解阶段。PTS可发生于体内任何部位的血管，形成静脉甚至动脉血栓。当血栓发生于子宫胎盘循环时可引起多种不良妊娠结局，包括妊娠期高血压疾病、胎儿生长受限、胎盘早剥、胎死宫内等，复发性流产也为其中一种。目前国内外有少数文献报道血栓前状态分子标志物TM、CD62P与妊娠期高血压疾病、晚期复发性流产相关，但对thrombomodulin(TM)、P—Selectin(SP、CD62P)、thromoboxaneB2(TXB2)与早期复发性流产的关系尚无报道。
血栓调节蛋白(thrombomodulin，TM)又称为凝血酶调节蛋白，是存在于内皮细胞表面的一种糖蛋白，属于内源性抗凝系统即蛋白C系统中的成员。正常情况下凝血酶可缓慢激活蛋白C，在生理浓度的钙离子存在下，此反应受到明显的抑制。但当凝血酶与TM结合，蛋白C的活化速率可增加1000倍以上。大血管中，内皮细胞蛋白C受体(EPCR)，能够与蛋白C结合并通过凝血酶一TM复合物进一步增强其活性。然后，活化蛋白C从EPCR上解离，与蛋白S在内皮细胞或血小板表面结合，灭活凝血因子Va和Ⅷa，发挥抗凝作用。TM除上述作为蛋白C的辅助因子抗凝以外，TM与凝血酶结合后，使凝血酶丧失了使纤维蛋白原凝结，活化血小板，激活V和Ⅷ因子的能力。TM与凝血酶的结合可以使凝血酶抑制物抗凝血酶Ⅲ和蛋白C抑制物灭活凝血酶的速率增加。因此，TM又是一种直接的抗凝剂。 P-选择素(P-Selectin,SP、CD62P)又称为血小板颗粒糖蛋白140，1989年MeEver等首先在静息的血小板膜上发现，其由789个氨基酸残基构成，相对分子质量140×103。P-选择素在血小板和内皮细胞中合成，分别存在于血小板的α颗粒和内皮细胞的Weibel-palade(棒状小体)中，尤其见于微静脉、小静脉的内皮细胞中。它可介导血小板黏附于内皮细胞，以及血小板中性粒细胞、血小板单核细胞的连接，使中性粒细胞激活，释放多种活性酶、细胞因子等血管活性物质，损伤内皮细胞，引起基底膜通透性增加、细胞外基质增生、纤溶活性下降、纤维蛋白原沉积等多种生物学效应，启动外源性凝血过程，产生纤维蛋白，引起血栓前状态，并且可以稳定血小板糖蛋白GP Ⅱ/Ⅲa与纤维蛋白原之间的联系，最终导致大量和稳定的血小板聚集。CD62p和CD63是血小板活化最特异和灵敏的分子标志物，正常人只有低水平活化，外周血CD62p只有3％～5％。多数学者认为血小板表面和外周血中的CD62P水平升高可反映血小板的活化程度，尤其见于血栓前状态。
血栓烷B2(thromoboxaneB2，TXB2)是血栓素A2(TXA2)在体内不稳定的代谢产物。TXA2是血小板受刺激后，花生四烯酸经血小板脂氧化酶和血小板环氧化酶作用后生成的重要代谢产物，具有强烈促进血管收缩和血小板聚集的生物活性。因此，外周血浆中TXB2的浓度反映了TXA2的浓度，间接反映机体内血小板的活化程度。
本研究选择了有复发性流产史的未妊娠和早期妊娠患者，以及正常育龄期未妊娠和早期妊娠者为研究对象，分析上述血栓前状态分子标志物，以期为血栓前状态引起的早期复发性流产的诊断和治疗提供有效的实验室指标。
研究目的：
探讨血栓前状态分子标志物TM、CD62P、TXB2在早期RSA中的预测价值。
对因PTS导致RSA的患者，找到敏感性和特异性较高的外周血筛查指标，有助于RSA的病因诊断、疗效判断和指导治疗，提高妊娠成功率。
研究材料及方法：
1.选择160例有RSA史未妊娠、85例有RSA史早期妊娠、34例正常育龄未妊娠、36例正常早期妊娠的妇女作为研究对象，检测外周血的TM、CD62P、TXB2水平，排除解剖、遗传、感染、内分泌、免疫因素，无合并内外科疾病，近期未使用对凝血功能有影响的药物。
研究组A组(RSA史未妊娠组)：
2007年6月～2007年12月在中山二院生殖免疫专科门诊就诊的有早期RSA史未妊娠的患者。
研究组B组(RSA史早期妊娠组)：
2007年6月～2007年12月在中山二院住院的有早期RSA史因早期妊娠或先兆流产入院安胎的患者，采血前未行治疗。
对照组A组(正常未妊娠组)：
月经周期正常，无不良孕史，无血栓性疾病史或家族史，近期未使用对凝血功能有影响的药物，非月经期，在体检中心体检正常的人群。
对照组B组(正常早期妊娠组)：
月经周期正常，既往无自然流产史，无血栓性疾病史或家族史，孕13周前，无先兆流产，B超提示宫内妊娠且与停经周数相符，见心管搏动。
2.试剂、主要仪器采用酶联免疫吸附(ELISA)统一测定；
试剂盒购于上海西唐科技有限公司；
SysmexCA-1500全自动凝血仪购自R本(试剂购买，检测机器等)；
3.TM、CD62P、TFXB2的检测方法用枸橼酸钠试管随机收集全血标本，分离血浆检测。
TM的检测
(1)试验原理采用ABC-ELISA法，用抗人Thrombomoduin(TM)单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的TM与单抗结合，加入生物素化的抗人TM，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入酶底物OPD，出现黄色，加终止液硫酸，颜色变深，在492nm处测OD值，TM浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中TM浓度。
(2)试剂盒组成 96孔微孔板：一块，已包被抗人TM单抗标本稀释液：一瓶第一抗体工作液：一瓶酶标抗体工作液：一瓶底物稀释液：一瓶终止液：一瓶洗涤液(20X)：一瓶标准品(冻干粉，40ng/ml)：二管OPD片：三片坐标纸：一张(3)准备试剂洗涤液：用蒸馏水1：20稀释底物工作液配制：使用前将OPD片放入底物稀释液中溶解，每片加液5ML标准品液配制：使用前每管中加入蒸馏水450ul溶解后即可。
(4)检测步骤①建立标准曲线：设标准孔8孔，每孔中各加入标本稀释液100ul，第一孔加标准品100ul，混匀后用加样器吸出100ul，移至第二孔，如此反复作对倍稀释至第七孔，最后从第七孔吸出100ul弃去，使之体积均为100ul。第八孔为空白对照；
②加样：待测品孔每孔各加入待测样品100ul：
③将反应板充分混匀后置37摄氏度120min；
④洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干；
⑤每孔中加入第一抗体工作液50ul：
⑥将反应板置37摄氏度60分钟；
⑦洗板：同前；
⑧每孔加酶标抗体工作液100ul；
⑨将反应板置37摄氏度60分钟；
⑩洗板：同前：
[11]每孔加入底物工作液100ul，置37摄氏度暗处反应5-10分钟；
[12]每孔加入50ul，终止液混匀；
[13]在492nm处测吸光值。
(5)结果计算、判断：
①所有OD值减去空白值后再计算
②以标准品20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0ng/ml之OD值在坐标纸上作图，画出标准曲线。
③根据样品OD值在该曲线图上查出相应的TM含量。
结果：
1、对照组中，妊娠对TM、TXB2的影响无统计学意义(P=0.252；P=0.013)，妊娠后CD62P有所下降，差异有统计学意义(P<0.001)；
2、研究组中，妊娠与非妊娠时的各项指标差异均无统计学意义；
3、研究组A组中的TM、CD62P、TXB2的数值均较对照组A组高，差异均有统计学意义(P=0.005；P=0.006；P=0.008)；
4、研究组B组的TM、CD62P均高于对照组B组，且差异均有统计学意义(P<0.00l：P<0.001)，TXB2在研究组B组中较高，但差异无统计学意义(P=0.465)；
5、根据ROC曲线分析，CD62P预测RSA的最佳临界值是21.177mmo/L，此时灵敏度是0.596，特异度是0.846：
6、流产2次与流产3次以上的研究组A组中CD62P的差异有统计学意义，(Z=-4.645，P<0.001)；流产3次与流产4及以上者比较，其差异无统计学意义，(Z=-2.381，P=0.017)。
结论：
1、非妊娠状态时，CD62P预测RSA的最佳临界值是21.177mmo/L，高于此数值时流产的可能性较大。
2、随着流产次数的增加，CD62P的数值相应的升高，流产2次与流产3次以上的患者差异显著，但流产3次以上CD62P升高不明显。
3、在非妊娠状态时，TM、TXB2对PTS导致的RSA具有预测价值。