论文部分内容阅读
目的: 构建二氢生物碟呤还原酶(quinoid dihydropteridine reductase,QDPR)及其p.93K-T突变过表达慢病毒，为QDPR p.93K-T功能研究提供强大工具。 方法: 分别提取包含QDPR及其突变基因大鼠的mRNA，并逆转录为cDNA，运用分子克隆技术将这两个基因插入慢病毒载体 pLVX-IRES-ZsGreen1。pLVX-IRES-ZsGreen1，QDPR及其 p.93K-T重组质粒分别与 psPAX2和pMD2G共转染293T细胞分别获得空载、QDPR、p.93K-T QDPR过表达慢病毒。将收获的慢病毒分别感染 NRK-52E细胞，用荧光显微镜观察细胞感染病毒情况，用 western blot检测QDPR蛋白在各组中的表达情况。 结果: 空载、QDPR、p.93K-T QDPR过表达慢病毒在荧光显微镜下均可见绿色荧光，感染率接近100％。Western blot结果显示QDPR、p.93K-T QDPR蛋白含量明显高于正常组和空载组。 结论: 成功构建了QDPR、p.93K-T QDPR的慢病毒载体，为p.93K-TQDPR功能研究提供强大工具。