人呼吸道腺病毒检测、分离及鉴定

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangtian575
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目的:对哈尔滨医科大学附属第二医院住院成人患者呼吸道感染的病毒进行检测:并对腺病毒株进行分离、型别鉴定及遗传进化分析。   方法:采用直接免疫荧光法(DIF),对2008年1月-2008年6月住院的.147名呼吸道疾病患者痰标本中的呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒A,B型、副流感病毒1,2,3型共七种病毒进行检测。腺病毒的分离鉴定是将患者痰标本经处理后接种HeLa细胞进行病毒培养,空斑实验分离纯化,提取分离到的病毒DNA,以六邻体通用引物PCR扩增,PCR扩增腺病毒DNA目的片段,将PCR阳性产物克隆到pMD19-T载体上进行序列测定,将其核苷酸序列及推断的氨基酸序列与GenBank数据库中基因进行比较分析并建立系统进化树。   结果:147例入选病人中病毒检测阳性者15例,病毒总体检出率10.2%,在所检测到的呼吸道病毒阳性15例中,流感病毒A型(Flu-A)8例、副流感病毒3型(PIV-3)8例、呼吸道合胞病毒(RSV)6例、副流感病毒l型(PIV-1)3例、腺病毒(Adv)2例、流感病毒B型(Flu-B)2例和副流感病毒2型(PIV-2)2例,单一病毒感染7例,两种病毒混合感染2例,三种病毒混合感染2例,四种病毒混合感染4例;分离纯化的腺病毒株六邻体测序结果与GenBank数据库ADV序列进行初步同源性分析,发现该腺病毒株与腺病毒7型最接近,六邻体核酸同源性为99%,其病毒种类有待进一步全基因序列同源性分析研究。   结论:2008年上半年哈尔滨医科大学附属第二医院住院成人患者呼吸道感染的病毒以流感病毒为主。测序的腺病毒株很可能为7型腺病毒株。
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