高糖高脂诱导的H9c2细胞调亡及黄芪的保护作用

• 作 者: 李素菡
• 机 构: 上海中医药大学
• 出 处: 上海中医药大学
• 发表日期: 2010年期

目的:研究大鼠心肌H9c2细胞在体外高糖高脂环境下产生凋亡的特点;建立体外心肌细胞凋亡模型,模拟糖尿病高血糖、高脂肪酸体内环境,探讨高糖高脂毒性对心肌细胞的损伤作用,及黄芪对心肌细胞保护的可能机制。　　
方法：本论文分为两部分。　　
1、高糖高脂诱导体外培养的大鼠心肌H9c2细胞凋亡模型的探讨。大鼠心肌H9c2细胞株,分为高糖组、高脂组、高糖高脂组。在培养的H9c2细胞中加入不同浓度的葡萄糖(25 mM、35 mM、50 mM)、棕榈酸(0.25 mM、0.5mM)、葡萄糖+棕榈酸(5.5 mM葡萄糖+0.25 mM棕榈酸、25 mM葡萄糖+0.25mM棕榈酸)与H9c2细胞分别作用24h、48h、72h,光镜下观察细胞生长状态;细胞核Hoechst 33342染色,荧光显微镜下观察H9c2细胞核凋亡形态;线粒体膜电位MitoTracker Orange CMTMRos染色,激光扫描共聚焦显微镜观察线粒体膜电位变化,荧光强度分析。　　
2、高糖高脂诱导H9c2细胞产生ROS及黄芪的作用。采用体外培养的大鼠心肌H9c2细胞,分为黄芪组(20g/L黄芪注射液)、黄芪+高脂组(20 g/L黄芪注射液+0.5 mM棕榈酸)、黄芪+高糖高脂组(黄芪+25 mM葡萄糖+0.25 mM棕榈酸)、高脂组(0.5 mM棕榈酸)、高糖高脂组(25 mM葡萄糖+0.25mM棕榈酸),共同孵育24h、48h、72h。光镜下观察细胞生长状态;细胞核Hoechst 33342染色,荧光显微镜下观察H9c2细胞核凋亡形态;线粒体膜电位MitoTracker Orange CMTMRos染色,激光扫描共聚焦显微镜观察线粒体膜电位变化,荧光强度分析。ROS荧光探针CM-H2DCFDA(5-(and-6)-chloromethyl-2,7-dichlorodihydrofluorescein diacctatc acctyl ester)染色,激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内ROS的水平,荧光强度分析。　　
结果：1、H9c2细胞在一定浓度高糖高脂培养下,一定比例的H9c2细胞发生凋亡,细胞核明显固缩、线粒体膜电位降低及细胞内ROS水平增高。2、在黄芪的作用下,H9c2细胞凋亡率发生明显降低,ROS形成减少,黄芪对高糖高脂诱导的细胞凋亡有明显的保护作用。　　
结论：高糖高脂能促进细胞内ROS产生,引起细胞线粒体膜电位丧失,细胞核片段化,诱发细胞凋亡,造成细胞不可逆的损伤,提示高糖高脂可能是糖尿病心肌细胞损伤的重要原因之一。黄芪可以降低细胞内ROS的产生,减少细胞凋亡,对心肌细胞起到一定的保护作用。