基于荧光和化学发光的生物分析新方法的研究

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随着分析化学的发展以及对分析方法要求的提高,生物分析的范围越来越广,近年来纳米材料的出现更使得生物分析与生物检测方法日新月异。本论文中,我们利用氧化石墨烯以及量子点建立了ALP、目标DNA以及DNaseⅠ的检测方法、利用化学发光建立了一种检测ALP的方法。主要内容如下:  1.利用GO猝灭荧光染料修饰核酸的荧光与Cu2+催化的类Fenton反应水解单链核酸用于进行ALP的检测。ALP能够特异的水解2-磷酸-L-抗坏血酸钠(SAP)的磷酸基团,使其变成还原性的抗坏血酸钠(SA)。在SA与Cu2+的存在下,能够通过类Fenton反应产生活性·OH自由基。产生的活性·OH自由基水解荧光素修饰的单链DNA,从而使得DNA变成小片段。在加入GO之后,荧光素标记的核酸小片段不会被吸附于GO表面,而使得荧光强度升高。相反没有加入ALP的DNA不会被水解,其会被吸附于GO表面而使得荧光被猝灭。基于此原理,我们建立了一种检测ALP的方法。  2.本论文通过一步法在合成CdTe QDs的过程中通过引入硫代碱基猝灭基团(BHQ-2)修饰的DNA(QDNA)直接合成了QDNA-CdTe-QDs复合物。连接到QDs的QDNA是一个能够在一定离子强度中形成发夹结构的序列。发夹结构的形成使得BHQ-2基团靠近QDs导致了二者之间发生FRET,QDs的荧光被猝灭基团所猝灭。Target DNA的加入能够与QDNA上的发夹结构互补配对,导致BHQ-2基团远离QDs表面使得FRET效率降低,QDs的荧光的强度与随着target DNA加入量的增大而增强。另一方面,DNaseⅠ能够水解QDNA变成小的片段,使得BHQ-2基团脱离QDs表面,进而引起QDs荧光发射强度的恢复。本论文据此建立了新型的target DNA与DNaseⅠ的检测方法。  3.建立了一种灵敏便捷的流动注射化学发光方法检测碱性磷酸酶(ALP)活性。Cu2+作为常见的催化剂能有效地增强luminol-H2O2的化学发光强度,而在加入PPi之后,PPi能够与Cu2+形成络合物从而抑制了Cu2+催化的luminol-H2O2的化学发光强度。在引入ALP的时候,ALP能够水解PPi变成磷酸根,释放出Cu2+从而使其催化的luminol-H2O2的化学发光强度恢复。该方法能够检测出1 mU/mL的ALP。
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