【摘 要】
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该论文利用病毒AcNPV-pro-UK感染昆虫细胞Sf9的方法表达pro-UK,主要目的在于找到在实验室中较大规模地培养Sf9细胞,并且得到高表达量pro-UK的实验方法.现在已经建立了三种较
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该论文利用病毒AcNPV-pro-UK感染昆虫细胞Sf9的方法表达pro-UK,主要目的在于找到在实验室中较大规模地培养Sf9细胞,并且得到高表达量pro-UK的实验方法.现在已经建立了三种较大规模的悬浮或半贴壁培养Sf9的方法:转瓶(磁力搅拌悬浮培养)、摇瓶(摇床悬浮培养)和滚瓶(半贴壁培养).细胞密度分别达到3.0×10<6>细胞/毫升(培养液)、3.7×10<6>细胞/毫升(培养液)和3.0×10<6>细胞/毫升(培养液).经过病毒AcNPV感染4天后,pro-UK的活性平均值分别达到900IU/ml、1400IU/ml和1500IU/ml培养液.这三种方法均适合于实验室中较大规模Sf9细胞的培养以及prp-UK的表达,其中,滚瓶培养的效果最好.其次,建立了几种方法分离纯化细胞培养上清中的pro-UK,均得到较好的结果.方法包括单克降抗体免疫亲和层析法、Zn-chelate Sepharose Fast Flow/ZnCl<,2>选择性沉淀与SP-Hitrap/SP-High Performance联用法以及PU08小分子亲和层析介质与SP-Hitrap/SP-High Performance联用法三种纯化方法.纯化出的pro-UK的比活最高分别可达到98167IU/mg、94981IU/mg和60100IU/mg,活性回收率分别为74.0%、45.6%和61.8%.还建立了两种在冻干纯品pro-UK过程中保持其活性的方法:冰冻干燥前加入明胶至终浓度为5%,或者加入EDTA(pH8.0)至终浓度为0.1%.
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