【摘 要】
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该文主要对葫芦科植物种子中的三种小分子核糖体失活蛋白的分离、纯化、性质及cDNA克隆和表达进行了研究.通过硫酸铵分级沉淀、CM-52阳离子交换层析、FPLC Mono S阳离子交换
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院
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该文主要对葫芦科植物种子中的三种小分子核糖体失活蛋白的分离、纯化、性质及cDNA克隆和表达进行了研究.通过硫酸铵分级沉淀、CM-52阳离子交换层析、FPLC Mono S阳离子交换层析,从丝瓜籽抽提液中分离到一种单体分子量为5226.5Da的多肽Luffin P1.其N端11个氨基酸序列与丝瓜籽中一种名为6.5K AGRP的多钛的部分序列相同,并与南瓜籽中一种胰蛋白酶抑制剂C2肽具有很高的同源性.Luffin S2是另一种来源于丝瓜籽的小分子核糖失活蛋白.该文利用3RACE法克隆了它的cDNA,并构建了它的融合表达质粒pGEX-4T-S2,该质粒在大肠杆菌中获得了成功表达.表达产物大部分为可溶性蛋白,每升培养液可获得40mg左右纯度约为95﹪的融合蛋白GST-Luffin S2.较强的N-糖苷酶活力.这是首个用基因工程方法成功表达的小分子核糖体失活蛋白.它的表达为深入开展小分子核糖体失活蛋白的理论和应用研究奠定了很好的基础.采用改进的分离纯化方案,首先抽提种子的蛋白体,然后再经硫酸铵分级沉淀、FPLC Mono S阳离子交换层析和Superose12凝胶过滤层析等步骤,从栝楼种子中分离到一种新的分子量为11.4kD的核糖体失活蛋白—trichokirin-S1.先抽提蛋白体的方法有效地排除了栝楼种子中其它核糖体失活蛋白的干扰,提高了分离效果.
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