【摘 要】
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该论文首次报道了人体新型cMpl分子配体的XP1功能基因的克隆及其重组表达,并初步对其药理活性进行了研究,以期能够深入探索TPO/cMlp-EC系统外存在的血小板生成机制的可能性.
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该论文首次报道了人体新型cMpl分子配体的XP1功能基因的克隆及其重组表达,并初步对其药理活性进行了研究,以期能够深入探索TPO/cMlp-EC系统外存在的血小板生成机制的可能性.通过酵母双杂交系统将人体cMpl的胞外区域cMpl-EC克隆到酵母双杂交诱饵载体pLexA中,并用它来筛选人胎肝cDNA文库,获得一个与cMpl-EC相互作用的新配体,命名为XP1.cDNA测序表明,其含有完整的993bp开放读码框,编码331成熟肽.将编码cMpl分子配体的XP1基因分别克隆于pET-28b的6个组氨酸基因的3末端,构建成pET-28b-xp1融合表达载体.为探讨TPO或重组蛋白XP1与人体cMpl受体胞外区cMpl-EC结合活性及其相关生物学特性,该研究采用pMAL蛋白表达及纯化系统,获得了在大肠杆菌中稳定表达,含有麦芽糖结合蛋白MBP与cMpl-EC的水溶性重组蛋白MBP-cMpl-EC.通过点杂交检测和生物感应仪检测证明,该融合蛋白具有与TPO结合的生物学活性,这为进一步研究人体cMpl的结构和功能打下了基础.体外蛋白质结合试验表明,重组蛋白XP1和MBP-cMpl-EC能够孵育结合在一起,其作用可以被重组蛋白XP1抗血清所封闭,证明重组蛋白XP1和MBP-cMpl-EC的结合作用具有特异性.提示重组蛋白XP1可能和TPO具有相同的作用.重组蛋白XP1在体外对小鼠巨核细胞集落形成单位有明显刺激作用,并且有明显的量效依赖关系.综上所述,XP1是继血小板生长因子TPO发现之后的又一血小板生成素受体cMpl的新型分子配体,这是世界上发现除TPO之外,人体内尚存在其它cMpl配体的首次报道.这一新型的cMpl分子配体将会促进有关巨核细胞增殖和分化及其血小板产生的分子机制的研究,也为开发具有自主知识产权的升高血小板新药打下了基础.
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