论文部分内容阅读
目的:动态，分期地观察白花丹提取物对CCl4大鼠肝纤维化模型的干预作用，并深入研究其作用的潜在靶点，揭示肝纤维化的病理生理机制，为开发利用白花丹治疗肝纤维化作出理论和实验的铺垫。并初步探讨CCl4诱导大鼠肝纤维化与血瘀证程度的联系，为中医药防治肝纤维化的基础研究提供新思路。 方法:SD大鼠150只，雄雌各半，随机抽取8只做空白对照组（第1组），空白对照组皮下注射生理盐水，余下皮下注射40g/LCCl4花生油溶液造模，用量0.3mL/100g，每周2次，连续4周。造模成功后，随机抽取8只做模型对照组（第2组），余下分成4组，每组30只:白花丹提取物低浓度组（第3组）、中浓度组（第4组）、高浓度组（第5组）、秋水仙碱阳性对照组（第6组）。第5周开始，给予相应药物灌胃干预（空白对照组、模型对照组用生理盐水灌胃），1次/日。取5周、6周、7周、8周、9周末，5个时间点，动态、分期地对各用药组大鼠进行抽样，每周为一期，取各组大鼠5只，末次给药后，禁食不禁水过夜，18h后对该期大鼠进行血瘀证候评价，腹腔麻醉，腹主动脉采血，用紫外—乳酸脱氢酶法及紫外—苹果酸脱氢酶法分别测定血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶(AST)的含量，用钒酸盐氧化法测定血清总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)的含量;用放射免疫法观察血清透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(P3NP)、Ⅳ型胶原(CIV)的含量。取其肝脏标本，观察肝脏大体形态并拍照，肝组织病理HE染色，获得肝纤维化分期评分。用免疫组化法染色观察肝组织Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白、α-肌动蛋白(α-SMA)沉积的部位和面积。空白对照组和模型对照组于第9周末处死，检测指标同上。 结果:1.全自动生化分析仪测定检测结果:第5周开始，用药各组血清ALT、AST、TBIL、DBIL及IBIL含量与模型组比较，有差异性(P＜0.05)，中、高浓度白花丹提取物组从第8周起差异显著(P＜0.01)，并随用药时间延长血清ALT、AST、TBIL、DBIL及IBIL含量降低。且中、高浓度组血清ALT、AST、TBIL、DBIL及IBIL含量与秋水仙碱阳性对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05）。2.放射免疫血清学检测结果:第5周开始，用药各组血清HA、P3NP、LN、CIV含量与模型组比较，有差异性(P＜0.05)，中、高浓度白花丹提取物组从第7周起差异显著(P＜0.01)，并随用药时间延长血清HA、P3NP、LN、CIV含量降低。且中、高浓度组血清HA、P3NP、LN、CIV含量与秋水仙碱阳性对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。3.病理HE染色检测结果:各组肝纤维化大体程度与大鼠血瘀证程度呈正相关，随着血瘀证征候等级的分值越高，大鼠肝脏肝细胞变性、坏死程度越高。4.免疫组化检测结果:白花丹提取物低、中、高浓度组均可明显降低造模大鼠肝脏内Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白和α-SMA的含量，用药后该3种蛋白表达均减弱，表达的面积缩小，颜色变浅，蛋白表达积分明显降低。且该作用具有时间及剂量的依赖性，差异有高度显著的统计学意义(p＜0.0l）。5.白花丹提取物组中、高浓度组在减轻大鼠肝脏肝纤维化大体观病理改变，降低肝纤维化四项指标的含量，改善肝功能，减轻肝纤维化程度的功能上，与秋水仙碱组相比，有高度显著性差异(p＜0.01)。 结论:1.白花丹提取物可以通过抑制肝细胞变性坏死、促进肝细胞再生、降低HSC细胞的胶原蛋白分泌功能、促进ECM降解等途径来逆转肝纤维化产生的病理变化，表现出明显干预作用。且该作用呈时间及剂量依赖性。2.中，高浓度白花丹组在改善肝纤维化大鼠肝脏病理改变，保护其肝功能，降低肝纤维化程度方面表现出的作用，明显强于秋水仙碱组。3.CCl4造模大鼠的肝纤维化程度与血瘀证程度呈正相关。