蒙古沙冬青AmCaM和AmERF2基因的克隆及功能分析Cloning

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qq6563187
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钙调素(Calmodulin,CaM)和乙烯应答因子(Ethylene-responsive factor,ERF)是植物细胞内两类与逆境相关的重要调控因子,克隆其基因并研究其在抗逆性中的作用是探讨植物抗逆性分子机理和挖掘关键抗逆基因的重要基础性工作。本论文从强抗逆植物蒙古沙冬青(Ammopiptanthus mongloicus)中克隆到AmCaM和AmERF2基因的cDNA,并对其进行了表达分析和功能验证。主要研究结果如下:  1.采用RT-PCR方法克隆到AmCaM基因cDNA编码区,由450 bp组成,编码含149个氨基酸残基的蛋白,其分子量为16.85 KDa,等电点为4.12。  2.采用RT-PCR方法克隆到AmERF2基因cDNA编码区,由687bp组成,编码含228个氨基酸残基的蛋白,其分子量为25.28KDa,等电点为9.33。  3.AmCaM和AmERF2的表达受高盐、干旱和低温胁迫的诱导,尤其在低温和干旱胁迫下其表达量显著上调,而在高盐胁迫下则显示了较弱的诱导表达。  4.将AmCaM和AmERF2编码区cDNA片段连接到植物表达载体pCAMBIA3301的35S启动子之后,然后采用农杆菌介导法将其转化拟南芥,经筛选和分子检测获得转基因株系。  5.将AmERF2转基因株系在不同非生物胁迫条件下进行表型鉴定,初步证明其在抵抗盐胁迫和水分胁迫中起一定作用。
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