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目的: 骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）接种于小鼠Heps肝癌移植瘤，测量肿瘤体积变化，记录小鼠生存期，并观察MSC接种后移植瘤局部免疫效应及肿瘤细胞促血管生成因子表达的变化，分析MSC对小鼠Heps肝癌移植瘤组织的作用机制，为MSC用于肝癌治疗的可能性及安全性提供理论依据。
方法: 体外贴壁培养法制备昆明小鼠骨髓间充质干细胞，分离培养传代扩增，流式细胞仪鉴定MSC表型。4，6-二脒基-2-苯基吲哚(4，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI)对MSC进行标记备用。随机取54只8周龄雄性昆明小鼠，接种Heps肝癌细胞于其皮下，建立Heps肝癌移植瘤模型。移植瘤长径达0.5～0.8cm时，随机分为3组，分别为MSC接种组（以下简称MSC组）、DAPI标记MSC接种组（以下简称DAPI组）、生理盐水对照组（(以下简称NS对照组)），每组18只。MSC组及DAPI组分别在小鼠Heps肝癌移植瘤内注射2×106MSC及DAPI标记的MSC，NS对照组注射同体积的生理盐水。每组各有6只荷瘤小鼠用于观察生存期。（1）自注射日起，隔日测量各组小鼠肿瘤长、短径，计算注射后3d、7d、14d及28d时肿瘤体积。（2）记录注射当天开始至小鼠死亡的时间，计算各组小鼠平均生存时间。（3）于注射后3d、7d、14d及28d，各组分批处死3只小鼠。取肿瘤组织，石蜡包埋并切片，苏木素-伊红（hematoxylin-esosin，HE）染色后光学显微镜观察。（4）取各组小鼠上述时间点的肿瘤组织切片，分别应用CD4抗体、CD8抗体和血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）抗体，行免疫组织化学染色。计数局部肿瘤组织中CD4+T细胞、CD8+T细胞数量，并应用图像分析软件对肿瘤细胞VEGF表达强度进行半定量分析。（5）取各组小鼠上述时间点的血清，通过双抗体夹心法酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA），检测干扰素（interferon，IFN）-γ和白介素（interleukin，IL）-12的水平。（6）取注射MSC7d后DAPI组小鼠肿瘤组织，行荧光冰冻切片检测瘤体内DAPI标记的MSC。
结果:
1.体外贴壁法成功制备MSC，得到比较纯化的MSC，流式细胞仪对第3代MSC进行鉴定，高表达CD29（97.84％），低表达CD34(5.56％)、CD45（7.66％）。
2.小鼠Heps肝癌腹水瘤细胞成功制备小鼠Heps肝癌移植瘤模型，成瘤率100％。
3.对DAPI组行荧光冰冻切片检测，在肿瘤组织内发现DAPI标记的MSC蓝色荧光，说明标记及注射成功。
4.注射MSC后3d至7d，MSC组及DAPI组肿瘤体积增大明显，与NS对照组有显著差异（P<0.05）。接种MSC后14d及28d时，各组小鼠肿瘤体积均较前增大，但差异无统计学意义（P>0.05）。
5.MSC组平均生存期为45天（95％可信区间：33～56天），DAPI组平均生存期为34天（95％可信区间：31～37天），NS对照组平均生存期为33天（95％可信区间：28～37天），其中，MSC组与NS组有显著差异（P<0.05），其余组间生存期差异无统计学意义（P>0.05）。
6.各组小鼠肿瘤HE染色：注射后3d及7d，MSC组及DAPI组肿瘤细胞分布密集，胞浆丰富，异性型明显，可见病理性核分裂相，小片状坏死灶，免疫细胞少见。NS对照组可见瘤细胞退变明显，呈空泡变性，肿瘤中间血管丰富，少量炎性细胞浸润，无明显坏死灶；14d及28d时，MSC组及DAPI组肿瘤细胞形态消失，呈凝固性坏死，组织结构不清，坏死明显，范围较对照组更大。NS对照组肿瘤细胞可见核固缩、核碎裂，片状坏死，血管破坏严重。
7.各组小鼠肿瘤CD4-IHC染色：注射后3d，MSC组癌巢内CD4+T细胞数量明显低于NS对照组（P<0.01），DAPI组CD4+T细胞数量也下降，与NS对照组比较有差异性（P<0.05）。注射后7d，MSC组及DAPI组癌巢内CD4+T细胞数量仍无明显增多，与NS对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。
8.各组小鼠肿瘤CD8-IHC染色：注射后3d，MSC组癌巢内CD8+T细胞数量进行性下降，与NS对照组比较有差异性（P<0.05）。注射后7d，MSC组及DAPI组CD8+T细胞数量无明显增加，与NS对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。
9.各组小鼠肿瘤VEGF-IHC染色：注射后3d，MSC组及DAPI组癌巢内VEGF表达明显下降，与NS对照组比较有明显差异（P<0.01）。注射后28d，MSC组VEGF表达仍低于NS对照组（P<0.01）。
10.ELISA结果显示，注射后3d，MSC组及DAPI组血清IL-12及IFN-γ的浓度较NS对照组明显降低（P<0.01）。注射后7d，MSC组血清IFN-γ的浓度降低更为明显，与NS对照组比较有显著差异性（P<0.01）。
结论:
1. 体外贴壁法成功制备MSC；利用小鼠Heps肝癌瘤源腹水成功制备原发性肝癌Heps荷瘤小鼠模型，成瘤率100％；DAPI成功标记MSC。
2. MSC可在原发性肝癌Heps荷瘤小鼠肿瘤组织内定植，MSC接种后早期降低CD4+T、CD8+T表达，减少IL-12、IFN-γ等细胞因子的分泌，抑制荷瘤小鼠T细胞免疫，促进肿瘤的生长。
3. MSC接种后晚期下调VEGF表达，诱发肿瘤组织大片坏死，延长荷瘤小鼠的生存期。