毛国杨HDA909基因的克隆及功能分析

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本研究从毛果杨中克隆了组蛋白去乙酰化酶(HDAC)的RPD3/HDA1亚家族基因HDA909,研究了其蛋白质序列、基因的表达及在干旱和真菌胁迫应答反应中的功能。
  (1)毛果杨HDA909基因的ORF序列长度为1323bp,编码一个由440个氨基酸构成的酸性、亲水性蛋白质,其等电点为5.28。毛果杨HDA909蛋白质的N端存在一个HDAC结构域。进化树分析结果显示,HDA909在进化上与胡杨HDA6亲缘关系最近。
  (2)毛果杨HDA909基因表达分析结果表明,在毛果杨不同器官中HDA909基因均可以表达,但在不同器官的表达没有特异性。
  (3)构建GFP-HDA909融合基因表达载体,采用基因枪法将其导入洋葱表皮细胞中,观察荧光信号,结果显示,HDA909蛋白在细胞核中定位。
  (4)构建pROKII-HDA909过量表达载体,将HDA909基因通过农杆菌介导法转化到毛果杨中,并分析HDA909基因在干旱胁迫和真菌胁迫下的功能。在甘露醇处理下,转基因与野生型幼苗在株高、根长、根数和鲜重上没有显著性差异。在干旱处理下,转基因与非转基因植株在株高和地径上也无显著性差异。离体叶片接种链格孢菌后,转基因植株叶片的菌斑数和菌斑面积均比非转基因植株低。DAB染色结果表明,过氧化氢在转基因植株叶片细胞中积累的较少,叶片受损程度较小。以上结果表明,HDA909基因的过量表达不影响杨树对干旱胁迫应答的耐受性,但在杨树真菌胁迫应答反应中具有重要的作用。
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