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α<,2>巨球蛋白(α<,2>M)是动物体内的一种非特异性免疫因子,在鱼类抵抗外来病原菌的入侵中具有重要作用.在研究草鱼对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila Ah)不易感的物质基础为α<,2>巨球蛋白的基础上,进一步研究其结构和功能.通过聚乙二醇分级沉淀、凝胶过滤和阴离子交换层析,从草鱼血浆中分离纯化了α<,2>M.在非变性条件下电泳,草鱼α<,2>M的电泳图谱表现为一条带;在变性条件下电泳,草鱼α<,2>M的电泳图谱表现为两条条带,表明草鱼α<,2>M由两种不同亚基组成,相对分子质量分别为95kD和80kD左右.草鱼α<,2>M与人α<,2>M的理化性质基本相似,在蛋白酶的作用下,有活性的天然S型构象变成无活性的F型.蛋白酶抑制试验表明草鱼α<,2>M有较强的抑制细菌胞外蛋白酶的活性.免疫双向扩散试验结果表明,草鱼α<,2>M与人α<,2>M的抗原性不交叉.从鲤鱼和草鱼肝脏中提取总RNA,通过对鲤鱼α<,2>M保守区和诱导区基因序列的分析,设计两对引物,分别用RT-PCR方法扩增并克隆了鲤鱼、草鱼的保守区α<,2>M基因序列和含有草鱼α<,2>M诱导区的一段基因.测定了草鱼α<,2>巨球蛋白诱导区基因序列并推测其氨基酸序列的一级结构,发现草鱼与鲤鱼的α<,2>巨球蛋白在诱导区差异很大.提示不同动物α<,2>M抑制胞外蛋白酶的差异性可能与诱导区的差异密切相关.将致病性嗜水气单胞J-1株接种LB培养基,摇床培养180rpm,28℃,24h,90℃30min灭活制得全菌苗.另将上述培养物离心,取上清,经硫酸铵沉淀,透析,90℃30min灭活,制得毒素苗.分别在全菌苗和毒素苗中加入适量草鱼α<,2>M.用小型饲料机制备5种饲料,分别含有全菌苗、毒素苗、有草鱼α<,2>M的全菌苗、有草鱼α<,2>M的毒素苗及普通饲料.实验用剑尾鱼分成5组,每组30尾.用上述5种饲料口服免疫剑尾鱼,连续投喂15d后,再投喂普通饲料20d;对照组用普通饲料连续投喂-35天.而后用AhJ-1株50LD<,50>腹腔注射攻击,全菌苗组30尾剑尾鱼的相对保护率为43.3％,全菌苗<+>α<,2>M组的相对保护率为53.3％,毒素苗组的相对保护率为26.7％,毒素苗<+>α<,2>M组的相对保护率为30％,对照组全部死亡.试验结果表明,α<,2>M能够增强免疫效果,对剑尾鱼具有一定的保护力.