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建立一种高效快速的从麦芽根中提取5—磷酸二酯酶的方法。通过将麦芽根粉碎后，取一定粒度的麦芽根加一定量的去离子水浸泡，过滤后得粗酶液。用紫外分光光度法测定5—磷酸二酯酶酶活，研究粉碎粒度、料液比、抽提温度、抽提时间等因素对麦芽根中5—磷酸二酯酶提取的影响。将原料粉碎至100目，以去离子水为提取剂，于4℃提取20h，料液质量比为1：10，5—磷酸二酯酶的酶活力可达160U/mL。该法简单、快速、准确、适应性强，为5—磷酸二酯酶的提取与检测提供了有效的工具。
麦芽根中提取的5—磷酸二酯酶的最适pH为5.0，pH在5.0～5.5之间时，酶的稳定性最好；5—磷酸二酯酶在65℃时，酶活力最高。对于酶的热稳定性而言，在40～65℃之间时，酶很稳定，其酶活损失仅为10％，超过65℃以后，酶的稳定性随着温度的升高迅速降低。酶的储存稳定性试验证明，该酶不宜久存，在利用麦芽根作为酶源时，有必要制成酶粉后在低温存放以尽量降低活力损失。
采用硫酸铵沉淀、透析以及DEAE—Sepharose层析技术，对麦芽根中5—磷酸二酯酶进行了分离纯化，纯化后的5—磷酸二酯酶的比活力提高到1224.4U/mg，纯度为粗酶液的73.5倍；而5—磷酸单酯酶的活力降低了98.5％，两种酶的活力比也由3.4提高到159.4。与已报道的其它纯化方法相比，该方法简单、原材料经济实惠。适用于酶解RNA法生产5—核苷酸。