从T淋巴细胞活化探讨凉血解毒治则治疗银屑病的作用基础

• 作 者: 刘欣
• 机 构: 北京师范大学
• 出 处: 北京师范大学
• 发表日期: 2010年期
• 关键词: 银屑病 凉血解毒治则 T淋巴细胞活化 血清药理学 信号通路

银屑病是一种在遗传背景和环境因素共同作用下，由T细胞介导的以角质形成细胞过度增生、炎症细胞浸润和新生血管形成为主要特征的慢性炎症性皮肤病。异常活化的T淋巴细胞及其过度产生的细胞因子是银屑病发病的中心环节，也是触发其病理改变的始动因素。T淋巴细胞的异常活化与浸润引起角质形成细胞过度增生、新生血管形成、血管通透性增加，从而表现出鳞屑、红斑、筛状出血等典型的银屑病临床症状。此病常反复发作，病程长、难以根治且大量脱屑，给患者的身心健康带来严重影响，是皮外科重点研究的疾病之一。中医认为“血热蕴毒、热毒入血伤络”是银屑病发病的主要病机之一，“凉血解毒”是其主要治则。　　
本研究采用佛波醇酯(phorbol12，13-dibutyrate，PDB)和离子霉素(Ionomycin，Iono)刺激活化JurkatT细胞株体外模拟银屑病的关键病理环节，采用血清药理学的方法，观察在凉血解毒治则指导下的治疗银屑病临床有效方剂凉血活血胶囊、其凉血、解毒组分以及本方中君药紫草的有效成分紫草素对T淋巴细胞增殖、活化、释放细胞因子及其信号转导通路的影响。　　
研究采用CCK-8比色法、流式细胞术及酶联免疫吸附试验(enzyme linked immune sorbent assay，ELISA)分别观察凉血活血胶囊及其凉血、解毒组分含药血清对T细胞增殖、活化和释放细胞因子的影响。结果显示，高、中、低剂量的凉血活血胶囊全方含药血清及其凉血、解毒组分的含药血清均可显著降低活化的T淋巴细胞的活性，明显抑制细胞表面活化分子CD69的表达，并有效下调INF-γ、IL-2和TNF-α的分泌。组间比较发现，全方组总体药效优于各拆方组，尤其在抑制细胞活性和降低TNF-α分泌上表现突出。解毒组除在调节IL-2和TNF-α分泌上作用与凉血组相当外，其余各项药效均优于凉血组；尤其是在对细胞活性及INF-γ分泌的抑制作用方面，解毒组可接近全方的作用效果。　　
紫草素对T淋巴细胞活化的作用结果显示，0.5～2μG/ml的紫草素均可显著抑制细胞活性、降低CD69的表达并可有效减少INF-γ，、IL-2和TNF-α的分泌。进一步研究其对信号转导通路的影响，采用流式细胞术发现紫草素可有效降低细胞内游离Ca2+浓度；ELISA法证实细胞内PKC磷酸化蛋白的含量明显降低；RT-PCR结果表明紫草素可明显抑制核转录因子NF-AT和AP-1组分c-Jun的mRNA表达；Westernblot法也证明紫草素对c-Jun及NF-κB的蛋白表达具有一定的下调作用。以上各项指标均呈现出一定的量效关系。　　
结论：凉血活血胶囊及其凉血、解毒组分均可抑制T淋巴细胞增殖、活化和释放细胞因子，且全方作用优于凉血、解毒拆方，提示银屑病血分“热”、“毒”并存，“血热蕴毒”是其重要病机，临床治疗凉血、解毒不可分割。具有凉血解毒作用的紫草素能通过对活化的T细胞信号转导通路的调控发挥免疫抑制作用。