【摘 要】
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旋毛虫病是一种严重的人畜共患寄生虫病.由于其临床症状复杂,诊断较为困难,研制有效的旋毛虫疫苗及诊断试剂一直是国内外学者研究的重点.旋毛虫抗原成分复杂,虫体难以在体外
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旋毛虫病是一种严重的人畜共患寄生虫病.由于其临床症状复杂,诊断较为困难,研制有效的旋毛虫疫苗及诊断试剂一直是国内外学者研究的重点.旋毛虫抗原成分复杂,虫体难以在体外培养和繁殖,因此寻找具有免疫保护作用的抗原基因,进而通过基因工程技术大量制备重组抗原疫苗及免疫诊断抗原是当前的研究热点.该室通过免疫筛选cDNA表达文库得到Ts87基因,基因片段长度为1172bp,已在GenBank成功注册,登陆号为AF399957.将成功构建的重组质粒PET-28a(+)/Ts87转化大肠杆菌BL21,大量培养扩增后经IPTG诱导,得到以包涵体形式存在的表达蛋白(分子量约40kDa).6M盐酸胍溶解包涵体后,采用His-Bind试剂盒(购自Novagen公司),利用固化金属离子配体亲和层析纯化目的蛋白.经过充分透析,用Protein Refoding试剂盒(购自Novagen公司)对表达产物进行复性后作为免疫抗原.该实验在体外大量表达了Ts87重组蛋白,成功地将该重组蛋白纯化、复性,证实了Ts87重组蛋白免疫NIH小鼠后产生的免疫保护性,并对其产生免疫保护性的机理做了初步研究.为Ts87重组蛋白作为旋毛虫病疫苗的候选抗原分子,提供了有力的实验依据.综合实验分析,Ts87重组蛋白的免疫保护性机制与Ts87基因的功能密切相关,虫体的天然Ts87蛋白可能参与了旋毛虫新生幼虫期的免疫逃避.深入研究旋毛虫虫体的天然Ts87蛋白在旋毛虫免疫逃避现象中发挥的作用,将有助于人们进一步理解旋毛虫寄生现象的免疫学基础.
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