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第一部分大鼠MSCs的体外分离、培养、扩增及天麻定向诱导神经细胞分化.研究目的:1.1、建立大鼠MSCs体外分离、培养及扩增的有效体系.1.2、建立中药天麻体外定向诱导MSCs分化为神经细胞体系.研究方法:2.1、密度梯度离心分离、含10％FBS的DMEM-LG培养体系贴壁培养、胰酶消化传代扩增,通过形态学、细胞周期分析、成纤维母细胞集落形成能力(CFU-F)及表型特征等方法对大鼠骨髓来源的MSCs进行分析鉴定.2.2、MSCs接种于预先置有盖玻片的6孔板中制备细胞爬片.待细胞融合至70％-80％时,吸去孔中的培养液,每孔加入预诱导液(20μl天麻/ml含10％FBS的L-DMEM),24小时后吸去预诱导液,实验组每孔加入诱导液(100μl天麻/ml不含FBS的L-DMEM).结论:4.1、成功的进行了大鼠骨髓来源的MSCs的分离、培养及扩增.4.2、分离、培养及扩增的细胞群中存在具有多潜能成体干细胞特性的无造血细胞系污染的MSCs.4.3、天麻体外能定向诱导大鼠MSCs分化为神经元样细胞.第二部分大鼠MSCs体内向造血细胞分化潜能的初步研究.研究目的:在体研究大鼠MSCs的造血分化潜能及初步探讨提高诱导造血细胞分化效率的方法.研究方法:建立以大鼠MSCs为供体细胞,亚致死量X射线照射的BALB/C小鼠为移植受体的移植模型,观察单纯MSCs输注组(实验组1)、血管扩张剂和MSCs共输注组(实验组2)、天麻诱导MSCs输注组(实验组3)的体内造血分化潜能,以照射后仅输注等量的无血清LG-DMEM培养液为对照组,分别于MSCs移植60天后通过FCM等方法对供体细胞源性造血植入水平进行检测,同时比较不同的移植组造血细胞分化能力.结论:4.1、大鼠MSCs能在亚致死量X射线照射的BALB/C小鼠造血组织中植入并分化表型为大鼠CD11a、CD45+等造血细胞.供体源性的造血主要发生在脾和骨髓,提示脾脏、骨髓具有利于MSCs向造血细胞分化的适合微环境.4.2、血管扩张剂使更多的MSCs透过肺泡,有利于供体细胞的"归巢",提高造血细胞分化效率.4.3、实验组3比实验组1诱导分化效率高,提示有可能部分MSCs诱导分化成神经干细胞后再分化成造血细胞.第三部分转基因小鼠MSCs体内向造血细胞分化的初步实验研究.研究目的:利用LacZ基因做跟踪标记,在体研究转基因小鼠MSCs的造血分化潜能.研究方法:建立以转基因小鼠MSCs为供体细胞,亚致死量X射线照射的BALB/C小鼠为移植受体的移植模型,观察单纯MSCs输注的体内造血分化潜能,分别于MSCs移植60天后,取肝脏,并取骨髓细胞做造血祖细胞集落培养,最后分别进行X-Gal染色鉴定.结论:4.1、转基因小鼠MSCs能在亚致死量X射线照射的BALB/C小鼠肝脏、骨髓等多种组织中分布存活.4.2、转基因小鼠MSCs能在亚致死量X射线照射骨髓等造血组织中植入并分化为造血祖/干细胞.