论文部分内容阅读
目的：动脉粥样硬化(AS)是一种脂质代谢紊乱与慢性炎症并存的慢性、持续性、进展性病变，针对AS的病变特征选择具有多靶点、多途径、多环节等生理活性的药物成为目前防治AS的趋势。木犀草素作为一种在中药中发现的天然化合物的合成衍生物，体外研究表明木犀草素可以抑制脂多糖诱导的巨噬细胞炎症反应和脂质积累。本研究以高脂高胆固醇饲料喂养的ApoE-/-小鼠为AS模型，系统地评估木犀草素对AS的干预效果及其机制的探究。为进一步研发含有木犀草素的复方制剂用于防治AS提供理论和实验依据。同时从营养护理学的角度改善AS的病变程度，为实行科学合理的膳食护理提供分子生物学依据，以支持AS患者的临床护理管理。
方法：
1.木犀草素对动脉粥样硬化作用的研究
将5周龄的ApoE-/-小鼠随机分为6组：ApoE-/-对照组，ApoE-/-模型组，木犀草素低剂量组(35mg/kg/d),木犀草素中剂量组(70mg/kg/d),木犀草素高剂量组(140mg/kg/d)，每组8只。除ApoE-/-对照组外其余各组均饲以高脂高胆固醇饲料，8只同周龄C57BL/6J小鼠为正常对照组。实验结束，我们采用油红O染色对各组小鼠全血管的斑块进行染色，进而采用Image-Pro-Plus对染色结果进行分析。
2.木犀草素抗动脉粥样硬化的机制研究
我们采用酶学试剂盒检测各组小鼠血脂四项(TC、TG、LDL-C、HDL-C)及血清炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-ɑ)；采用冰切油红O染色法观察肝脏脂质沉积面积及数量；采用RT-qPCR法及WesternBlot分析肝脏组织PCSK9及LDLR的基因表达，进而采用Image-Pro-Plus对WesternBlot的结果进行图像分析；采用DHE染色观察颈动脉原位活性氧的产生；同时对肝肾组织的石蜡包埋切片进行HE染色观察木犀草素的生物安全性。
结果：
1.木犀草素对动脉粥样硬化作用的研究
ApoE-/-小鼠在给予高脂高胆固醇饲料喂养四个月后，模型组小鼠体重较正常对照组明显增加(P＜0.05)。给药组小鼠较模型组体重降低，且木犀草素中、高剂量组小鼠的体重明显低于模型组(P＜0.05)。油红O染色则显示模型组小鼠主动脉发生明显病理改变，斑块面积显著增加，木犀草素给药组动脉斑块面积明显减小，其中高浓度木犀草素组斑块面积减少最多。
2.木犀草素抗动脉粥样硬化的机制研究
采集各组小鼠血清进行酶联免疫检测显示模型组小鼠TC、TG、LDL-C、IL-6、IL-1β及TNF-ɑ明显升高，木犀草素可以剂量依赖性地降低血清TC、TG、LDL-C、IL-6、IL-1β及TNF-ɑ，升高HDL-C水平。DHE结果显示木犀草素治疗组中颈动脉ROS的产生呈剂量依赖性减少，木犀草素治疗组肝脏的脂质沉积面积及严重chengdu1明显低于模型组。此外，RT-qPCR及WesternBlot分析结果表明木犀草素通过抑制肝脏内PCSK9mRNA转录以及蛋白的表达，提高肝脏组织中LDLR水平，促进血浆中LDL-C的代谢，但木犀草素对LDLRmRNA水平没有影响。
结论：木犀草素具有抗AS的作用，可抑制ApoE-/-小鼠动脉壁斑块面积的增加，主要机制为：抑制肝脏PCSK9基因表达及改善脂质代谢障碍，抑制动脉ROS的产生，降低血清炎症因子水平，多途径、多靶点干预AS的发生发展。
方法：
1.木犀草素对动脉粥样硬化作用的研究
将5周龄的ApoE-/-小鼠随机分为6组：ApoE-/-对照组，ApoE-/-模型组，木犀草素低剂量组(35mg/kg/d),木犀草素中剂量组(70mg/kg/d),木犀草素高剂量组(140mg/kg/d)，每组8只。除ApoE-/-对照组外其余各组均饲以高脂高胆固醇饲料，8只同周龄C57BL/6J小鼠为正常对照组。实验结束，我们采用油红O染色对各组小鼠全血管的斑块进行染色，进而采用Image-Pro-Plus对染色结果进行分析。
2.木犀草素抗动脉粥样硬化的机制研究
我们采用酶学试剂盒检测各组小鼠血脂四项(TC、TG、LDL-C、HDL-C)及血清炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-ɑ)；采用冰切油红O染色法观察肝脏脂质沉积面积及数量；采用RT-qPCR法及WesternBlot分析肝脏组织PCSK9及LDLR的基因表达，进而采用Image-Pro-Plus对WesternBlot的结果进行图像分析；采用DHE染色观察颈动脉原位活性氧的产生；同时对肝肾组织的石蜡包埋切片进行HE染色观察木犀草素的生物安全性。
结果：
1.木犀草素对动脉粥样硬化作用的研究
ApoE-/-小鼠在给予高脂高胆固醇饲料喂养四个月后，模型组小鼠体重较正常对照组明显增加(P＜0.05)。给药组小鼠较模型组体重降低，且木犀草素中、高剂量组小鼠的体重明显低于模型组(P＜0.05)。油红O染色则显示模型组小鼠主动脉发生明显病理改变，斑块面积显著增加，木犀草素给药组动脉斑块面积明显减小，其中高浓度木犀草素组斑块面积减少最多。
2.木犀草素抗动脉粥样硬化的机制研究
采集各组小鼠血清进行酶联免疫检测显示模型组小鼠TC、TG、LDL-C、IL-6、IL-1β及TNF-ɑ明显升高，木犀草素可以剂量依赖性地降低血清TC、TG、LDL-C、IL-6、IL-1β及TNF-ɑ，升高HDL-C水平。DHE结果显示木犀草素治疗组中颈动脉ROS的产生呈剂量依赖性减少，木犀草素治疗组肝脏的脂质沉积面积及严重chengdu1明显低于模型组。此外，RT-qPCR及WesternBlot分析结果表明木犀草素通过抑制肝脏内PCSK9mRNA转录以及蛋白的表达，提高肝脏组织中LDLR水平，促进血浆中LDL-C的代谢，但木犀草素对LDLRmRNA水平没有影响。
结论：木犀草素具有抗AS的作用，可抑制ApoE-/-小鼠动脉壁斑块面积的增加，主要机制为：抑制肝脏PCSK9基因表达及改善脂质代谢障碍，抑制动脉ROS的产生，降低血清炎症因子水平，多途径、多靶点干预AS的发生发展。